影響ELISA試劑盒測定成果的原因和解決辦法，有哪些?

　　影響ELISA試劑盒測定成果的原因和解決辦法，有哪些?

　　ELISA是什么?

　　ELISA是酶聯(lián)免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 的簡稱。它是在免疫酶技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術(shù) 。

　　酶聯(lián)免疫吸附試驗的標(biāo)準(zhǔn)程序，通常是把蛋白、抗體、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗體(capture Ab)固定在固相載體上，再加入一級檢測抗體(primarydetection Ab)，形成一個抗原抗體的復(fù)合物。如果該抗體已經(jīng)用酶(enzyme)標(biāo)記了，即可用來直接測定抗原的量，若無，則可利用另一個酶標(biāo)記的二級抗體來測定抗原的量。測定抗原量的方法是加入該酶的底質(zhì)(substrate)，作用后產(chǎn)生出現(xiàn)的顏色深淺和樣本中的抗原量呈正比的關(guān)系，依此原理計算出樣本中的抗原總量或濃度。

　　ELISA試劑盒方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定，具有靈敏度高，操作簡略等優(yōu)點，但是在詳細(xì)實驗過程中影響要素較多，而且要按照嚴(yán)厲的闡明要求，在臨床檢驗中除正常反響外，有時?？梢姷揭恍╁e誤成果(即假陽性或假陰性成果)。

　　影響ELISA測定錯誤成果的原因主要有：

　?、贅?biāo)本要素;

　　②試劑要素;

　?、鄄僮饕?。

　　一、類風(fēng)濕因子

　　人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子(RF)能夠與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶符號二抗的FC段直接結(jié)合，然后導(dǎo)致假陽性。

　　解決辦法:

　　1.用F(ab)2替代完好的IgG;

　　2.標(biāo)本用聯(lián)有熱變性(63℃，10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有用);

　　3.檢測抗原時，能夠用2-巰基yi醇等加入到標(biāo)本稀釋液中，使RF降解。

　　二、補體

　　ELISA系統(tǒng)中固相一抗和符號二抗過程中，抗體分子發(fā)作變構(gòu)，其FC段的補體C1q分子結(jié)合位點被暴露出來，使C1q 能夠?qū)⒍哌B接起來，然后形成假陽性。

　　解決辦法:

　　1.用EDTA稀釋標(biāo)本;

　　2.用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。

　　三、嗜異性抗體

　　人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig(s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來，也能形成假陽性。

　　解決辦法:

　　可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動物Ig(s)，但加入量不足或亞類不同時無效。

　　四、嗜靶抗原的本身抗體

　　抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的本身抗體，有時能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定成果。

　　解決辦法:

　　測定前需用理化方法將其解離后再測定。

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