色譜柱的清洗方法

來源：北京吉瑞森科技有限責任公司 2012年04月17日 13:35

尺寸排阻色譜柱的清洗方法

分子尺寸排阻色譜柱吸附的主要原因

用于高分子分子量測定的分子尺寸排阻（SEC）色譜柱有SuperAW系列、α系列、PW·PL系列等產品。柱中填充介質與樣品間常會發(fā)生：

（1）離子性吸附:分子尺寸排阻色譜柱中的樹脂填充介質，由于羧基帶有負電荷（盡管非常少），樣品中帶有正電荷的組分將會與其發(fā)生離子吸附作用。

（2）疏水性吸附:分子尺寸排阻色譜柱中的樹脂填充介質，會與一些疏水性較高的樣品（如：具苯環(huán)物質）發(fā)生疏水吸附作用。

硅膠基質的填料，常會與一些難溶性膜蛋白等疏水性物質發(fā)生疏水性吸附作用。另外，殘存的硅醇基會與堿性物質間發(fā)生離子吸附。對于硅膠基質的填料，雖然不是發(fā)生吸附作用，但必須考慮酸性條件下官能團會發(fā)生脫落或堿性條件下硅膠基質會發(fā)生溶解的情況。

分子尺寸排阻色譜柱的清洗方法

☆樹脂基質分子尺寸排阻色譜柱的清洗方法

1、離子性吸附:對于陽離子性吸附物質，通過提高鹽濃度進行過柱清洗。（1mol/L的醋酸緩沖液）

2、疏水性吸附:對于疏水性吸附物質，可通過提高有機溶劑的濃度（PW·PL：50%、α及SuperAW：100%可）進行過柱清洗。

3、復合吸附:對于陽離子性·疏水性物質的去除，可提高鹽濃度進行過柱，水洗后，提高有機溶劑濃度進行過柱。

☆硅膠基質分子尺寸排阻

1、堿性物質的去除（離子性吸附）；通過提高淋洗液的鹽濃度（通常0.5mol/L）進行過柱清洗。

2、疏水性吸附的去除（疏水性吸附）；在淋洗液中添加甲醇、乙腈（10-20%）等水溶性有機溶劑進行過柱清洗。本法請注意緩沖液中鹽的析出。

3、在淋洗液中添加尿素、中性界面活性劑；在淋洗液中添加6-8mol/L的尿素或0.2-0.3%的中性界面；活性劑（Triton、Tween、Brij等）后進行過柱清洗。但需注意尿素及界面活性劑的柱中殘留。

一般來說，清洗時間可選擇為過柱5-10個柱體積便可。在附吸成分其吸附力*時，即使進行過清洗，柱性能也有可能得不到恢復。另外，請充分考慮淋洗液的pH值，以避免損壞色譜柱。

反相硅膠

反相硅膠色譜柱吸附的主要原因

反相硅膠柱填充介質（固定相）與樣品間常常會發(fā)生下列吸附現象：

（1）殘存硅醇基與堿性物質間的離子吸附；

（2）硅膠表面的金屬雜質與金屬配位物質間的吸附；

（3）疏水性*的物質在柱中的蓄積。以上現象，會引起反相色譜柱柱效下降、拖尾、重復性不良等狀況的發(fā)生

反相硅膠

反相硅膠——疏水性物質的去除:

使用有機溶劑（乙腈、甲醇、乙腈與THF的混合溶劑）進行清洗。

考慮樣品成分對于有機溶劑的溶解性，選用比淋洗液濃度高的有機溶劑、或選用極性較低的有機溶劑進行過柱清洗。這種情況下，有必要注意淋洗液中鹽的析出現象。

反相硅膠——堿性物質（金屬配位物質）的去除:

使用酸性水溶液與有機溶劑的混合液（0.1%磷酸、0.1%TFA/乙腈、甲醇的混合液）進行過柱清洗。

*一般來說，清洗時間可選擇為過柱5-10個柱體積便可。在附吸成分其吸附力*時，即使進行過清洗，柱性能也有可能得不到恢復。另外，請充分考慮淋洗液的pH值，以避免損壞色譜柱。

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