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【實驗工具】Elisa實驗中標準曲線的繪制

來源：武漢博歐特生物科技有限公司   2024年09月14日 14:25  

【實驗工具】Elisa實驗中標準曲線的繪制

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酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）

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是一種廣泛用于基礎(chǔ)科學(xué)研究、臨床應(yīng)用研究和診斷的免疫學(xué)測定方法。

ELISA 技術(shù)依賴于抗原（即靶蛋白）與針對目標抗原的“一抗”之間的相互作用。抗原的存在通過添加底物的酶聯(lián)抗體催化來確認，其產(chǎn)物可以通過目視檢查定性檢測，或使用光度計或分光光度計的讀數(shù)進行定量檢測。

今天和大家分享一下Elisa實驗中標準曲線的繪制方法：


可以使用各種繪圖軟件繪制ELISA標準曲線。下面以“Curve Expert1.3”軟件為例，ELISA標準曲線的繪制方法如下：（“Curve Expert1.3”軟件可以聯(lián)系Biorbyt中國辦事處獲取）


1. 啟動“Curve Expert”
2. 在X軸上輸入標準品的OD值（雙抗體夾心輸入OD-blank值），在Y軸上輸入對應(yīng)的濃度值，如圖所示：


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3. 單擊按鈕圖片出現(xiàn)如下對話框：


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4. 點擊【ok】按鈕，出現(xiàn)以下兩個對話框。


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5. 在*一個對話框的右上角出現(xiàn)一些曲線的名稱。從“1”開始，依次點擊曲線名稱，右下角會出現(xiàn)對應(yīng)的擬合曲線。（一般選擇*一個多項式擬合）
6. 根據(jù)擬合曲線選擇ELISA擬合度*佳的曲線，雙擊，出現(xiàn)如下對話框：
注意：選擇系數(shù)（即“r”值）*佳的曲線方程進行運算。在下面的對話框中，右上角有一個“r”值?！皉”值越接近 1，擬合度越好。


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7.  按[Ctrl]鍵+[L]鍵，出現(xiàn)如下對話框：


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8. 輸入標準的OD值，點擊【Calculate】，即可得到待測蛋白質(zhì)的實際含量（樣品稀釋N次，則計算值再乘以N）。
9. 如果想要獲取ELISA擬合曲線的方程，請在步驟6中對話框的空白處單擊鼠標右鍵，然后選擇“Information”
10. 得到如下對話框：點擊“Copy”


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在你需要的位置粘貼，即可得到如下數(shù)據(jù)：


Rational Function: y=(a+bx)/(1+cx+dx^2)

Coefficient Data:

a = -5.9369973

b = 166.94422

c = 1.8471095

d = -0.86731519


11.修改繪圖的 X、Y 軸的相關(guān)屬性。選擇步驟9所示圖中的第二行“Graph Properties”，修改后點擊確定保存。


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