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要用顯微鏡在高倍鏡下檢查樣品，有許多因素需要考慮，其中包括分辨率、數(shù)值孔徑（NA）、物鏡的工作距離，以及物鏡前透鏡采集圖像所用介質(zhì)的折射率。我們通過(guò)這篇文章簡(jiǎn)要地看一下如何在蓋玻片和物鏡前透鏡之間利用鏡油幫助提高NA和分辨率，提高成像質(zhì)量。
什么是鏡油？
在物鏡前透鏡和標(biāo)本蓋玻片之間的空隙中填充浸沒(méi)液體可提高物鏡的分辨率。通過(guò)使用折射率接近的油，可以減少光的散射和折射，提高成像的清晰度和分辨率?？諝獾恼凵渎蕿?.0，而顯微鏡載玻片和蓋玻片的折射率通常為1.5。考慮到這一差異，浸泡液體的目的是匹配（盡可能接近）玻片的折射率，從而增加形成最終圖像的光線(xiàn)量。大多數(shù)浸油的折射率為1.51。常見(jiàn)折射率見(jiàn)表1。
為什么要用鏡油？
通常鏡油提高成像質(zhì)量主要通過(guò)以下幾個(gè)方面：
1
增加分辨率
當(dāng)光從樣品通過(guò)蓋玻片進(jìn)入物鏡時(shí)，如果中間存在空氣，它會(huì)發(fā)生折射和散射，從而降低成像質(zhì)量。鏡油的折射率與玻璃蓋玻片和物鏡的折射率相似，使用鏡油可以減少光的折射和散射，提高圖像的分辨率。
2
提高光的收集能力
鏡油可以增加物鏡的數(shù)值孔徑（NA），即物鏡收集光的能力。數(shù)值孔徑越高，顯微鏡的分辨率和成像質(zhì)量就越好。
3
減少光損失
鏡油可以減少由于反射和散射引起的光損失，使更多的光線(xiàn)進(jìn)入物鏡，從而提高圖像的亮度和對(duì)比度。
4
減少光學(xué)偽影
在高倍顯微鏡觀察時(shí)，使用鏡油可以減少由光折射和反射引起的光學(xué)偽影，使得圖像更加清晰。
哪些物鏡需要使用鏡油
以下圖為例，物鏡上標(biāo)識(shí)的“100X/1.25 OIL”，指100倍放大倍數(shù)，NA=1.25，“OIL”指需要使用鏡油。
選擇鏡油的參考因素
在選擇鏡油時(shí)，需要考慮以下幾個(gè)因素：
折射率：選擇折射率與蓋玻片和物鏡相匹配的鏡油，以減少光的折射和散射。
粘度：鏡油的粘度應(yīng)適中，以確保在使用過(guò)程中能夠均勻涂抹，不易形成氣泡。
化學(xué)相容性：選擇與顯微鏡和樣品材料相容的鏡油，避免化學(xué)反應(yīng)導(dǎo)致的損壞。
自發(fā)熒光：對(duì)于熒光顯微鏡應(yīng)用，應(yīng)選擇低自發(fā)熒光的鏡油，以避免影響成像質(zhì)量。
徠卡guan方建議使用的原廠鏡油
可供選擇的鏡油有多種，下面兩種常用的點(diǎn)擊鏈接可以直達(dá)商城采購(gòu)：
1
Type F Immersion Liquid
徠卡guan方貨號(hào)：11513859
10ml
23℃折射率 1.5180
嚴(yán)格根據(jù)ISO 8036制造，保證成像質(zhì)量，廠家推薦的鏡油
超低自發(fā)熒光，提升信噪比，適用熒光應(yīng)用
適用于APO油鏡，以完成最佳成像
2
Type N Type N Immersion Liquid
徠卡guan方貨號(hào)：11513860 (20ml) 和11513861 (250ml)
嚴(yán)格根據(jù)ISO 8036制造
低端應(yīng)用可以使用
兩種容量規(guī)格
如何使用鏡油？
以配置5X 10X 20X 40X干鏡和100X油鏡為例，從使用低倍物鏡5X-10X查看樣本開(kāi)始，在樣品上找到感興趣的區(qū)域。
?
逐步切換至40X物鏡并均調(diào)至焦面。
?
通過(guò)物鏡轉(zhuǎn)盤(pán)（物鏡的連接底座）在40x和100x物鏡之間切換但不要直接接觸高倍物鏡。
?
從顯微鏡的一側(cè)看去，小心地將1滴鏡油直接滴到蓋玻片上。將高倍物鏡擺入到位（繼續(xù)從一側(cè)觀察載物臺(tái)），先粗調(diào)然后微調(diào)對(duì)焦，讓物鏡前透鏡與鏡油發(fā)生接觸。有些油浸物鏡的前透鏡是凹面的，這意味著還應(yīng)該在物鏡上滴一滴油以防止氣泡被困在凹透鏡中。
?
然后可以再次通過(guò)目鏡觀察。僅使用微調(diào)對(duì)焦來(lái)調(diào)整視野。雖然高倍物鏡含有彈簧加載式轉(zhuǎn)換器，但在這個(gè)階段粗聚焦很容易導(dǎo)致蓋玻片或載玻片破裂，也可能損壞物鏡前透鏡。
?
即便您計(jì)劃觀察其他載玻片，也應(yīng)在此階段清除物鏡上的鏡油以防止可能污染顯微鏡的其他部分。對(duì)于不適合浸沒(méi)的顯微鏡部件和物鏡，鏡油會(huì)滲透并造成損壞。用擦鏡紙?jiān)阽R片上擦一次，去除多余的油。每次擦拭都要用干凈的擦鏡紙擦拭物鏡前透鏡，直到?jīng)]有殘留油的痕跡。可使用除油溶液或少量二甲苯最終清潔透鏡。同樣，在對(duì)透鏡應(yīng)用任何溶液之前，請(qǐng)務(wù)必仔細(xì)了解物鏡制造商的建議。
此外，建議在使用鏡油時(shí)注意以下幾點(diǎn)：
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選擇合適的鏡油：根據(jù)顯微鏡制造商的建議選擇合適的鏡油，確保其與顯微鏡和樣品的材料相容。
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正確使用：在使用鏡油時(shí)，注意避免夾帶空氣，涂抹均勻。
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及時(shí)清潔：使用后及時(shí)用鏡頭清潔紙和合適的溶劑清潔物鏡，確保沒(méi)有鏡油殘留。
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定期維護(hù)：定期檢查和維護(hù)顯微鏡，確保所有部件的清潔和正常運(yùn)行。
更多關(guān)于徠卡顯微鏡使用和維護(hù)保養(yǎng)的使用注意事項(xiàng)，可以留言與徠卡服務(wù)工程師取得聯(lián)系。
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