高密度微載體生物反應器大規(guī)模培養(yǎng)

　河南省預防型疫苗工程技術研究中心，河南省生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)研究院與河南省生物醫(yī)藥工程技術研究中心等多個團隊通力合作，在生物制品學雜志發(fā)表關于生物反應器大規(guī)模培養(yǎng)狂犬病病毒的成果，該研究為150 L生物反應器高密度微載體工藝放大提供了技術支持，為后期開發(fā)更大規(guī)模高密度微載體反應器工藝奠定基礎。

　　狂犬病病毒(rabies virus, RABV)是致死率高的病毒，分布于多種哺乳動物宿主，這些宿主與人類之間存在復雜的關系。目前，RABV引起的狂犬病每年造成約5.9萬人死亡。迄今為止，狂犬病發(fā)病后幾乎無治愈病例，主要通過提前接種疫苗來進行預防。我國每年人用狂犬病疫苗的消耗量約1600萬人份。對于狂犬病疫苗的制備，RABV大規(guī)模擴增是關鍵技術，也是決定成本的重要因素之一。目前主要采用生物反應器(借助微載體)培養(yǎng)Vero細胞，擴增RABV，再純化病毒等步驟制備狂犬病疫苗，具有成本較低、技術較易控制等優(yōu)點，本研究在30 L生物反應器的基礎上，嘗試采用150 L生物反應器、高密度微載體培養(yǎng)Vero細胞，擴增RABV，以期為規(guī)模化培養(yǎng)RABV，制備狂犬病疫苗提供參考。

　　搖瓶培養(yǎng)目前主要作為細胞培養(yǎng)擴增步驟，直接應用于規(guī)?；a(chǎn)越來越少。單個搖瓶產(chǎn)能較小，規(guī)?；a(chǎn)需至少數(shù)十個搖瓶同步進行，導致人工操作復雜且強度大，存在一定的暴露操作風險。搖瓶培養(yǎng)技術不再是規(guī)模化生產(chǎn)的發(fā)展方向。

　　應用生物反應器培養(yǎng)Vero細胞是疫苗制備的關鍵技術，是重要的發(fā)展方向之一。且生物反應器易操控，適合規(guī)?；糯螅瑧梅磻魑⑤d體懸浮培養(yǎng)Vero細胞具有明顯優(yōu)勢。生物反應器培養(yǎng)可獲得更高的收益率，生物反應器的控制系統(tǒng)可以完成更多工作，可監(jiān)測和控制的參數(shù)數(shù)量基于生物反應器中的傳感器和控制元件數(shù)量，可以更好的進行培養(yǎng)工藝條件的篩選，優(yōu)化。工藝簡單、操作靈活，有良好的適用性；培養(yǎng)工藝容易放大，可為生物體生長和增殖提供均質的環(huán)境；產(chǎn)品質量穩(wěn)定，非常適合工業(yè)化生產(chǎn)；管路布置較為簡單，能提供較好的無菌條件，細胞生長過程中不易污染。該研究在30 L生物反應器規(guī)模實驗的基礎上，實現(xiàn)了在150 L生物反應器進行微載體濃度20 g/L的Vero細胞培養(yǎng)，并接種RABV，細胞病變過程正常且可控，病毒收獲液滴度最高可達8.5 lg LD50/m L, 30和150 L生物反應器培養(yǎng)的終末代細胞各項檢測均符合《中國藥典》三部(2020版)要求，為后期開發(fā)更大規(guī)模高密度微載體生物反應器工藝奠定基礎。