T4 UvsX重組酶 T4 UvsX Recombinase是一種來源于T4噬菌體的重組酶，屬于RecA/Rad51叢的酶，它在RPA反應中發(fā)揮關鍵作用。T4 UvsX重組酶具有典型的ABC三結構域，分別負責ATP結合，相互作用與DNA結合。它通過識別單鏈DNA上連續(xù)的6-8個核苷酸堿基，與DNA形成球狀多聚體結構。

T4 UvsX Recombinase由E.coli表達的重組蛋白，是將蛋白基因接入穩(wěn)定表達載體，經克隆篩選，質量驗證，挑選的穩(wěn)定表達株，由化學成分確定的培養(yǎng)基（不含有任何動物源成分）發(fā)酵制備，工藝穩(wěn)定，保證了產品質量及批次間的一致性。

規(guī)格參數：

貨號：EH03501

規(guī)格：100ug/1mg/5mg/20mg

為工業(yè)客戶提供g級。

質量控制:

純      度: 經高效液相色譜（SEC-HPLC）和SDS-PAGE檢測，純度大于95%.

使用說明：

長期儲存于-80℃，首(空)次使用后保存于-20℃,避免反復凍融。

工作機理:

T4 UvsX重組酶 T4 UvsX Recombinase在RPA反應中的主要作用是:

(1)穩(wěn)定單鏈DNA

在常溫下，雙鏈DNA初變性為單鏈DNA后，T4 UvsX Recombinase立即識別并結合單鏈DNA，形成穩(wěn)定的蛋白-DNA復合體，防止單鏈DNA再次回環(huán)成雙鏈。

(2)引物退火

在T4 UvsX Recombinase的保護下，引物與單鏈DNA進行退火，與之形成短的雙鏈DNA片段。

(3)替換與釋放

當聚合酶識別引物-模板雙鏈體并開始進行延伸時，T4 UvsX Recombinase被替換并釋放，使單鏈DNA完(空)全暴露，供聚合酶延伸。

(4)再循環(huán)

延伸產生的新合成DNA同樣暴露為單鏈，T4 UvsX Recombinase再次識別并結合，實現(xiàn)再循環(huán)，直至擴增完成。

T4 UvsX重組酶優(yōu)點:

• 可在常溫下高效穩(wěn)定單鏈DNA，這是RPA實現(xiàn)等溫擴增的關鍵。

• 與DNA的結合和釋放是反復可逆的，這使其在RPA反應中的再循環(huán)利用成為可能。

• 易于保存和純化，更利于RPA技術的商業(yè)化開發(fā)。

• 目前已有成熟的生產工藝，降低了RPA成本，有利于其廣泛應用。

T4 UvsX重組酶在RPA技術中主要應用如下:

1. RPA反應中的關鍵酶

T4 UvsX Recombinase在RPA反應中用于穩(wěn)定和保護單鏈DNA，并在引物退火和聚合酶延伸過程中實現(xiàn)替換和再循環(huán)，這是RPA技術實現(xiàn)等溫擴增的關鍵。

2. 商業(yè)RPA試劑盒

許多商業(yè)RPA試劑盒中的重組酶成分主要由T4 UvsX Recombinase提供，如TwistDx的Recombinase Polymerase Amplification kit等。

3. POCT檢測試劑

RPA技術因其快速、簡便的優(yōu)點，非常適合POCT。而T4 UvsX Recombinase的應用是實現(xiàn)RPA的POCT檢測試劑的關鍵。一些基于此的產品已用于臨床快速診斷，如Ebola病毒、Meningitis等的檢測。

4. 病原體核酸檢測

設計與特定病原體高度保守的基因片段同源的引物，與T4 UvsX Recombinase及RPA技術聯(lián)用，可實現(xiàn)病原體DNA/RNA的快速、高靈敏度檢測,用于臨床病原體感染的診斷。

5. 基因檢測與分型

針對特定的基因突變或多態(tài)性位點設計引物，與T4 UvsX Recombinase及RPA技術聯(lián)用，可用于相關基因型的檢測與分型，應用于遺傳病基因診斷等。

6. 體外核酸檢測

將與靶核酸同源的引物與T4 UvsX Recombinase及RPA技術聯(lián)用，可實現(xiàn)體外各種DNA、RNA的高通量檢測，如miRNA、circRNA的檢測等，用于生物學基礎研究與臨床診斷。

7. 轉基因生物檢測

設計特異性引物擴增轉基因片段，與T4 UvsX Recombinase及RPA技術聯(lián)用，可實現(xiàn)轉基因生物的快速檢測，用于食品安全等領域。

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