抗體保存相關(guān)問題解答

      抗體（antibody，Ab）是機體在體內(nèi)存在的外來分子、微生物等抗原物質(zhì)刺激下，由B淋巴細胞或記憶細胞增殖分化成的漿細胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白（immunoglobulins，Ig），主要分布在血清中，也分布于組織液及外分泌液中。

    抗體保存得當(dāng)與否，直接決定了抗體的活性和使用效果！如果抗體保存得當(dāng)，大部分抗體活性都可以維持數(shù)月甚至數(shù)年。請謹記無論何時請按照說明書推薦的保存條件正確保存抗體.

一、一般抗體的保存方法

1. 收到抗體后請務(wù)必在 12000rpm 離心 1-5 分鐘后再打開管蓋進行分裝和保存(如果抗體體積小于50ul，請延長離心時間至 5 分鐘，以保證全部抗體均離心下來）！

2. 對于大部分抗體，比較合適的保存方式是分裝后保存在-20℃或-80℃。

對絕大多數(shù)抗體來說，保存在-20℃是全足夠了。沒有任何證據(jù)顯示保存在-80℃會有更多的好處！

分裝可以大程度的降低反復(fù)凍融對抗體活性的損害，同時也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。分裝的量以一次實驗用完為好，最少不能少于 10ul每份。因為分裝體積越小，抗體的濃度越可能會受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。復(fù)融后的分裝抗體如果一次用不完，將剩余母液保存在4℃，避免再凍起來！抗體工作液應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完，在4℃盡量不要超過1天。絕對避免將抗體保存在自動除霜冰箱中。盡量將抗體保存在冰箱里層，而不是門上。

3. 大部分抗體收到后 4℃短暫保存1-2周對抗體活性是沒有影響的。

如果抗體很快（1-2 周）會使用，推薦在4℃保存，這是為了避免反復(fù)凍融對抗體活性的損害。如果要長期保存則最好是在-20℃ or -80℃。最關(guān)鍵的一點是要根據(jù)說明書推薦的方式來正確的保存抗體！

但是，腹水形式的產(chǎn)品請在收到后立即凍起來！因為該類產(chǎn)品含有大量的蛋白酶，長期在4℃保存會導(dǎo)致抗體的降解！

4. 大部分抗體的運輸條件：一般的運輸過程需要1-2周的時間，所以是在4℃的條件下來完成的。4℃運輸最主要的目的是為了避免反復(fù)凍融對抗體活性的損害（如果使用干冰運輸，那么收到時抗體是凍起來的，為了分裝就需要解凍。這就多了一次凍融的過程）。 所以運輸過程中絕對避免干冰運輸！

二、特殊抗體的保存條件：

1.酶聯(lián)抗體：永遠保存在 4℃，避免凍起來。否則會導(dǎo)致酶活性的下降或者喪失。

2.偶聯(lián)抗體：所有偶聯(lián)抗體都需要在棕色管中或使用錫箔紙避光4℃保存。尤其是熒光抗體，對光極為敏感，因此在所有的實驗階段也是要避光操作的！

3.IgG3 的同型對照：永遠保存在4℃，避免凍起來。因為如果出現(xiàn)凍融過程，該抗體非常容易形成多聚體（無論是保存還是運輸，絕對避免反復(fù)凍融），反復(fù)凍融會導(dǎo)致抗體變性，導(dǎo)致多聚體形成，從而降低抗體的結(jié)合能力！

三、抗體保存其它相關(guān)信息：

1.關(guān)于加入甘油保存：

有些人會加 50%的甘油到抗體中來避免反復(fù)凍融，甘油在-20℃會降低冰點。這對很多抗體可能是可行的。加入甘油的溶液不建議在-80℃保存，因為這已經(jīng)超過了甘油的冰點。如果您要加入甘油來保存抗體的話，請謹慎注意無菌操作，避免污染！

2.關(guān)于蛋白保護劑：

蛋白在高濃度時更不容易降解（1 mg/ml 或者更高），這就是為什么在抗體中加入 BSA 之類作為穩(wěn)定劑的原因了；另一方面，加入的蛋白也可以減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來標記的話，則不能加入蛋白穩(wěn)定劑，因為這些穩(wěn)定劑會和抗體一起競爭結(jié)合標記物。

關(guān)于NaN3（sodium azide）的使用：

3.為了防止微生物污染，NaN3經(jīng)常被加入到抗體中（終濃度 0.02% (w/v)）。NaN3

在下述情況中不能使用NaN3：

（1）如果抗體用于染色或處理活細胞，用于體內(nèi)研究：

（2）NaN3在抵抗微生物的同時，對其它大部分有機物也是有毒的， 因為它阻斷了線粒體的 cytochrome electron transportsystem.

（3）要偶聯(lián)帶有氨基基團的抗體：NaN3會干擾任何含有氨基基團的偶聯(lián)，因此在進行偶聯(lián)之前，應(yīng)將NaN3去除。偶聯(lián)后的抗體可以加入NaN3保存，但是濃度只能是0.01％。對于需要偶聯(lián)的抗體，thimerosal (merthiolate)可以替代NaN3作為保護劑！

4.NaN3的去除方式：

可以通過凝膠電泳或過濾的方式去除！IgG 的分子量是 150kDa (IgM 是~ 600kDa); NaN3的分子量只有65Da。使用 cut off 14kDa 的濾膜即可將NaN3從抗體中去除。