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碘己醇是一種廣泛使用的非離子型造影劑，用于提高 X 射線分析的對(duì)比度，低滲透的特性可以使其通過(guò)腎臟快速清除，防止再吸收和進(jìn)一步代謝，這使得碘己醇比其他造影劑使用更安全。在許多臨床成像應(yīng)用中，造影劑可以提高掃描的對(duì)比度和空間分辨率，但由于造影劑的毒性和副作用，其已知濃度的制劑及其純度分析對(duì)于它們的安全使用和準(zhǔn)確診斷非常重要。本文介紹了一種簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的 HPLC-CMS 分析碘己醇的方法。
實(shí)驗(yàn)方法
實(shí)驗(yàn)試劑
應(yīng)用中使用的所有溶劑均為 HPLC 級(jí)。兩個(gè)碘己醇標(biāo)準(zhǔn)品：一個(gè)是純度為 99.99% 的認(rèn)證參考物質(zhì)，第二個(gè)純度≥95%。
實(shí)驗(yàn)儀器
所有實(shí)驗(yàn)均在 AIS expression® CMS 上進(jìn)行，與 AVANT™ UHPLC 系統(tǒng)聯(lián)用，參數(shù)如表 1 所示。
HPLC/UV/MS 分析碘己醇（100微克/毫升）
在室溫下，碘己醇會(huì)發(fā)生異構(gòu)化，在 HPLC/UV/MS 分析中可以檢測(cè)到兩個(gè)峰。
這兩個(gè)峰 ( 圖1A ) 是由于在碘己醇的中心苯環(huán)上附著了大量的碘原子，從而阻礙了苯環(huán)上酰氨基的N-乙?；鶊F(tuán)的旋轉(zhuǎn)。這兩種化合物本質(zhì)上是“旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體”，在室溫下在水溶液中緩慢互換。
圖1：(A) 碘己醇的 HPLC 圖（254nm），(B) 質(zhì)子化碘己醇的提取離子圖（m/z 821.8），(C) 在保留時(shí)間 4.06 分鐘處峰值的平均質(zhì)譜圖。
兩個(gè)峰通過(guò)質(zhì)譜（MS）分析確認(rèn)，顯示出相同的質(zhì)荷比（m/z）為821.9（見(jiàn)圖 1B 和 1C），并且在它們的源內(nèi)碰撞誘導(dǎo)解離（CID）質(zhì)譜圖中沒(méi)有可見(jiàn)差異（見(jiàn)圖 2A 和 2B）。在x射線分析中，兩個(gè)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體都發(fā)揮作用。
圖2：(A) 在保留時(shí)間 3.61 分鐘處峰值的平均源內(nèi) CID 質(zhì)譜圖，(B) 在保留時(shí)間 4.06 分鐘處峰值的平均源內(nèi) CID 質(zhì)譜圖。
HPLC/UV法進(jìn)行純度分析
通過(guò)比較相同濃度下碘己醇樣品與碘己醇認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)品的 HPLC 響應(yīng)，樣品與認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積比可快速進(jìn)行濃度和純度分析。
計(jì)算碘己醇濃度比的公式如下:
碘己醇樣品和認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)品的 HPLC 圖譜如圖 3A 和 3B 所示。
碘己醇樣品的兩個(gè)峰面積之和的平均值為 714 (圖3A)，碘己醇認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)品的平均值為 740 (圖3B)。通過(guò)濃度配比計(jì)算，計(jì)算得到樣品中碘己醇的濃度為 0.0964mg/ml，純度為 96.4%，符合規(guī)定的產(chǎn)品純度 ≥95%。
圖3: (A) 碘己醇樣品 (0.1mg/ml) 的 HPLC 圖譜 (254nm); (B) 碘己醇標(biāo)準(zhǔn)品(0.1mg/ml) 的 HPLC 圖譜(254nm)。
為了更準(zhǔn)確地測(cè)定碘己醇樣品的純度，在 25-500μg/mL 的五種不同稀釋水平下，對(duì)每種濃度進(jìn)行三次測(cè)試，建立了碘己醇認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的校準(zhǔn)曲線。得到的線性校準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)為 0.9999 (圖4)，顯示出良好的線性。
圖4: 碘己醇 HPLC 色譜標(biāo)度曲線 (254nm)
采用碘己醇校準(zhǔn)曲線法，測(cè)定碘己醇樣品的純度為 97.5%，高于樣品規(guī)定的低純度95%，與通過(guò)比值計(jì)算得到的測(cè)量值僅相差 1.1%。因此對(duì)于認(rèn)證的參考標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，通過(guò)校準(zhǔn)曲線的方法或直接紫外響應(yīng)比分析的方法都可以用于具有紫外吸收的有機(jī)化學(xué)品的純度測(cè)定。
實(shí)驗(yàn)結(jié)論
Advion Interchim Scientific® AVANT™ (U)HPLC系統(tǒng)能夠?yàn)樵煊皠┑饧捍嫉募兌确治鎏峁?zhǔn)確的測(cè)試方法。UHPLC-CMS 聯(lián)用，不僅可以確認(rèn)目標(biāo)化合物，還可以快速確定雜質(zhì)。
相關(guān)產(chǎn)品
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