ELISA在食品微生物檢測(cè)中的應(yīng)用方法

1. 直接ELISA法

直接ELISA法適用于檢測(cè)食品中的微生物抗原。具體步驟如下：

· 將微生物抗原包被在微孔板上。

· 加入待測(cè)樣本，樣本中的抗體與包被的抗原結(jié)合。

· 加入酶標(biāo)記的二抗，與樣本中的抗體結(jié)合。

· 洗滌后加入底物，顯色反應(yīng)后測(cè)定吸光度值，從而定量測(cè)定樣本中的抗體含量。

2. 間接ELISA法

間接ELISA法適用于檢測(cè)食品中的微生物抗體。具體步驟如下：

· 將已知微生物抗原包被在微孔板上。

· 加入待測(cè)樣本，樣本中的抗體與包被的抗原結(jié)合。

· 加入酶標(biāo)記的抗抗體（即二抗），與樣本中的抗體結(jié)合。

· 洗滌后加入底物，顯色反應(yīng)后測(cè)定吸光度值，從而定量測(cè)定樣本中的抗體含量。

3. 雙抗體夾心法

雙抗體夾心法適用于檢測(cè)食品中的大分子微生物抗原。具體步驟如下：

· 將已知的第一抗體包被在微孔板上。

· 加入待測(cè)樣本，樣本中的抗原與第一抗體結(jié)合。

· 加入酶標(biāo)記的第二抗體，與抗原的另一表位結(jié)合，形成雙抗體夾心復(fù)合物。

· 洗滌后加入底物，顯色反應(yīng)后測(cè)定吸光度值，從而定量測(cè)定樣本中的抗原含量。

4. 競(jìng)爭(zhēng)ELISA法

競(jìng)爭(zhēng)ELISA法適用于檢測(cè)食品中未知濃度的微生物抗原。具體步驟如下：

· 將已知濃度的微生物抗原包被在微孔板上。

· 同時(shí)加入待測(cè)樣本和酶標(biāo)記的抗原，二者競(jìng)爭(zhēng)與固相抗原結(jié)合。

· 洗滌后加入底物，顯色反應(yīng)后測(cè)定吸光度值。由于待測(cè)樣本中抗原濃度的不同，與固相抗原結(jié)合的酶標(biāo)記抗原量也會(huì)不同，從而影響顯色反應(yīng)的深淺。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線可定量測(cè)定樣本中的抗原含量。

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