造成細(xì)胞污染的微生物主要包括細(xì)菌、真菌、支原體、病毒以及外源性細(xì)胞。這些微生物可以通過實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、實(shí)驗(yàn)材料、操作人員或?qū)嶒?yàn)設(shè)備等途徑進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng),導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)物的污染。以下列舉了一些常見的造成細(xì)胞污染的微生物及其特點(diǎn),一起來學(xué)習(xí)下吧!
細(xì)菌污染
1. 大腸桿菌(Escherichia coli)
① 形態(tài)特點(diǎn):為革蘭氏陰性短桿菌,大小約 0.5 - 0.7μm×1 - 3μm,細(xì)胞呈桿狀,兩端鈍圓,多數(shù)單獨(dú)存在或成雙排列。
② 生長特性:是兼性厭氧菌,在有氧和無氧環(huán)境下都能生長。在細(xì)胞培養(yǎng)基中生長迅速,能利用多種糖類作為碳源。一般在適宜溫度(37℃)下,幾個(gè)小時(shí)內(nèi)就可以使培養(yǎng)基變得渾濁,它會(huì)消耗培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分,產(chǎn)生酸性代謝產(chǎn)物,使培養(yǎng)基的 pH 值下降。
③ 對(duì)細(xì)胞的影響:產(chǎn)生的內(nèi)毒素和外毒素會(huì)破壞細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能,導(dǎo)致細(xì)胞腫脹、破裂和死亡。例如,在哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中,大腸桿菌污染會(huì)使細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變,細(xì)胞之間的連接被破壞,細(xì)胞的正常代謝和增殖活動(dòng)受到嚴(yán)重干擾。
2. 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)
① 形態(tài)特點(diǎn):屬于革蘭氏陽性菌,呈球形,直徑約 0.8 - 1.2μm,在顯微鏡下常以葡萄串狀排列,無芽孢、鞭毛,多數(shù)無莢膜。
② 生長特性:是需氧或兼性厭氧菌,對(duì)營養(yǎng)要求不高,在普通的細(xì)胞培養(yǎng)基中能很好地生長。生長速度較快,適宜溫度為 37℃左右,能在培養(yǎng)基表面形成光滑、濕潤、邊緣整齊的圓形菌落。
③ 對(duì)細(xì)胞的影響:它能產(chǎn)生多種毒素,如溶血毒素、殺白細(xì)胞毒素等,這些毒素會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。而且金黃色葡萄球菌還能在細(xì)胞表面黏附并形成生物膜,干擾細(xì)胞與外界的物質(zhì)交換和信號(hào)傳遞,影響細(xì)胞的正常生理功能。
3. 假單胞菌(Pseudomonas)
① 形態(tài)特點(diǎn):革蘭氏陰性菌,細(xì)胞呈直或稍彎的桿狀,大小約 0.5 - 1μm×1.5 - 5μm,有單端鞭毛,能運(yùn)動(dòng),無芽孢。
② 生長特性:是需氧菌,對(duì)營養(yǎng)要求相對(duì)較低,在潮濕環(huán)境下生長良好。在細(xì)胞培養(yǎng)基中,它可以利用多種有機(jī)化合物作為碳源和能源,生長速度快,在 25 - 37℃的溫度范圍內(nèi)都能繁殖,能使培養(yǎng)基迅速變渾濁。
③ 對(duì)細(xì)胞的影響:假單胞菌產(chǎn)生的一些酶和毒素,如蛋白酶、脂酶和外毒素等,會(huì)分解細(xì)胞成分,破壞細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu),導(dǎo)致細(xì)胞裂解死亡。
真菌污染
1. 黑曲霉(Aspergillus niger)
① 形態(tài)特點(diǎn):屬于絲狀真菌,菌絲有分隔,多核。分生孢子梗從特化了的厚壁而膨大的菌絲細(xì)胞(足細(xì)胞)垂直生出,頂部膨大成球形的頂囊,頂囊表面長滿一層或兩層輻射狀小梗,最上層小梗瓶狀,頂端著生成串的球形分生孢子。在顯微鏡下可以看到黑色的孢子頭,這是其典型的特征。
② 生長特性:是好氧菌,在較寬的溫度范圍(10 - 45℃)和 pH 范圍(2 - 9)內(nèi)都能生長。在細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中,它可以在培養(yǎng)基表面、培養(yǎng)瓶壁等地方生長,形成黑色的菌斑。黑曲霉能利用多種碳源和氮源,如糖類、蛋白質(zhì)等,生長過程中會(huì)產(chǎn)生大量的菌絲,這些菌絲會(huì)在培養(yǎng)基中蔓延。
③ 對(duì)細(xì)胞的影響:黑曲霉的菌絲生長會(huì)消耗培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分,改變培養(yǎng)基的物理和化學(xué)性質(zhì)。同時(shí),它還可能產(chǎn)生一些毒素,如黃曲霉毒素(雖然黑曲霉產(chǎn)生黃曲霉毒素的情況相對(duì)較少)和其他次生代謝產(chǎn)物,這些物質(zhì)會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用,抑制細(xì)胞生長,甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡。
4. 白色念珠菌(Candida albicans)
① 形態(tài)特點(diǎn):是一種酵母樣真菌,細(xì)胞呈卵圓形,大小約 2 - 6μm×3 - 9μm,在適宜的環(huán)境下,以出芽方式繁殖,形成芽生孢子。在玉米 - 吐溫 80 培養(yǎng)基等特定培養(yǎng)基上,可形成假菌絲。
② 生長特性:是兼性厭氧菌,在有氧和無氧環(huán)境下都能生長。它可以在含有葡萄糖、酵母提取物等營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基中良好生長,適宜生長溫度為 37℃左右,這和哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)溫度相似。白色念珠菌在培養(yǎng)基中生長時(shí),會(huì)使培養(yǎng)基變得渾濁,同時(shí)在表面可能形成白色的菌膜。
③ 對(duì)細(xì)胞的影響:白色念珠菌能黏附在細(xì)胞表面,通過分泌一些水解酶,如蛋白酶、磷脂酶等,破壞細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞壁,侵入細(xì)胞內(nèi)部,影響細(xì)胞的正常功能,導(dǎo)致細(xì)胞死亡。而且它還可能引起細(xì)胞的免疫反應(yīng),進(jìn)一步加重對(duì)細(xì)胞的損害。
支原體污染
特點(diǎn):
① 支原體是一類沒有細(xì)胞壁的原核微生物,大小介于細(xì)菌和病毒之間,一般在 0.2 - 0.3μm 之間。形態(tài)多樣,有球形、絲狀、分枝狀等。由于沒有細(xì)胞壁,它們具有高度的多形性,在不同的生長條件下可以改變形狀。
② 支原體是最小的能夠獨(dú)立生活的原核生物,對(duì)營養(yǎng)要求苛刻,需要從宿主細(xì)胞獲取膽固醇、脂肪酸、氨基酸等營養(yǎng)物質(zhì)。它們可以在細(xì)胞表面或者細(xì)胞內(nèi)寄生,生長速度相對(duì)較慢,在細(xì)胞培養(yǎng)中不易被察覺。
③ 支原體污染會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生多種不良影響。它會(huì)消耗細(xì)胞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分,改變培養(yǎng)基的 pH 值,影響細(xì)胞的生長速度,使細(xì)胞生長緩慢甚至停滯。同時(shí),支原體還能改變細(xì)胞的基因表達(dá)和代謝途徑,干擾細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的偏差。例如,在細(xì)胞轉(zhuǎn)染等實(shí)驗(yàn)中,支原體污染可能會(huì)使轉(zhuǎn)染效率降低,影響基因表達(dá)的研究。
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