TopoGEN同源重組（HR）修復(fù)報(bào)告試劑盒（基于瞬時(shí)檢測(cè)的試劑盒）方案

TopoGEN質(zhì)粒轉(zhuǎn)染分析的HR DNA修復(fù)報(bào)告試劑盒，旨在讓研究人員研究他們選擇的細(xì)胞系中的同源重組（HR）。該試劑盒使用GFP作為HR途徑的體內(nèi)讀數(shù)，并包括在您自己的實(shí)驗(yàn)室中設(shè)置系統(tǒng)的適當(dāng)控制。新：TopoGEN現(xiàn)在提供一種負(fù)擔(dān)得起的試驗(yàn)規(guī)模（試劑盒中3個(gè)質(zhì)粒各50ug），讓您測(cè)試新的基于細(xì)胞的試劑盒的功效。

艾美捷TopoGEN拓?fù)洚悩?gòu)酶II條帶移位試劑盒：

產(chǎn)品型號(hào)：DR3050

類別：細(xì)胞環(huán)境DNA修復(fù)，移動(dòng)瞬時(shí)檢測(cè)DNA修復(fù)系統(tǒng)

標(biāo)簽：DNA修復(fù)，同源重組，HR DNA報(bào)告基因，質(zhì)粒DNA

TopoGEN拓?fù)洚悩?gòu)酶II條帶移位試劑盒詳情：

這是一個(gè)基于質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的報(bào)告系統(tǒng)，旨在允許客戶篩選或檢查影響同源重組（HR）DNA修復(fù)過(guò)程的任何因子。它將在大多數(shù)可以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系中工作。試劑盒使用GFP作為HR途徑的體內(nèi)讀出。試劑盒包括兩個(gè)被驗(yàn)證為高質(zhì)量DNA的質(zhì)粒（見(jiàn)圖1和圖2）：

• HR-GFP。當(dāng)這個(gè)報(bào)告基因轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中時(shí)，不會(huì)表達(dá)GFP，因?yàn)榛蛟陔p盒結(jié)構(gòu)中發(fā)生了突變。5'盒包含一個(gè)破壞性的I-Sce1位點(diǎn)/終止密碼子，而3'盒在同一區(qū)域是野生型，但包含阻止表達(dá)的缺失。

• I-Sce1表達(dá)質(zhì)粒。這是一種巨型內(nèi)切核酸酶，除了位于HR-GFP的5'盒中的單個(gè)I-Sce1位點(diǎn)外，不會(huì)在人類基因組的任何地方切割。

當(dāng)這兩個(gè)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到同一細(xì)胞時(shí)，將有一個(gè)%GFP讀數(shù)，反映HR修復(fù)的效率。由于試劑盒僅基于兩個(gè)DNA，可以實(shí)現(xiàn)合理的轉(zhuǎn)染效率，并且可以在幾乎所有“可轉(zhuǎn)染”的細(xì)胞系中檢查HR修復(fù)過(guò)程。轉(zhuǎn)染后，會(huì)產(chǎn)生一群GFP+細(xì)胞，可以進(jìn)行分選或通過(guò)活細(xì)胞成像跟蹤。HR修復(fù)的效率與轉(zhuǎn)化為GFP+表型的細(xì)胞百分比相關(guān)。重要的是要在平行培養(yǎng)中包含帶有eGFP的轉(zhuǎn)染對(duì)照。eGFP對(duì)照基因可以單獨(dú)購(gòu)買(mǎi)，不在試劑盒中。

誰(shuí)應(yīng)該購(gòu)買(mǎi)這個(gè)試劑盒？

對(duì)篩選針對(duì)整個(gè)HR DNA修復(fù)途徑的因子、藥物、基因或基因產(chǎn)物感興趣的研發(fā)實(shí)驗(yàn)室會(huì)發(fā)現(xiàn)這個(gè)試劑盒非常有用。DNA修復(fù)途徑充滿了可藥物化的目標(biāo)，這一點(diǎn)已經(jīng)得到了很好的證實(shí)。針對(duì)DNA修復(fù)的因子可能是很好的抗癌或抗病d藥物。此外，識(shí)別與DNA修復(fù)相互作用的其他基因和基因產(chǎn)物對(duì)于尋找新的藥物靶點(diǎn)也很重要。這個(gè)試劑盒的一個(gè)主要優(yōu)點(diǎn)是它在活細(xì)胞的環(huán)境中運(yùn)行。這意味著結(jié)果將具有很高的生理相關(guān)性，因?yàn)槭录诩?xì)胞內(nèi)實(shí)時(shí)發(fā)生。此外，由于它基于熒光，可以利用單細(xì)胞成像跟蹤經(jīng)歷修復(fù)的個(gè)體細(xì)胞，也可以使用時(shí)間推移成像跟蹤這些細(xì)胞的后代。這個(gè)試劑盒僅基于質(zhì)粒報(bào)告基因，允許研究人員將系統(tǒng)放置在他們選擇的任何細(xì)胞系中。這在主要興趣是細(xì)胞系或譜系模型時(shí)提供了極大的靈活性。無(wú)需創(chuàng)建帶有整合報(bào)告基因的穩(wěn)定細(xì)胞系（這需要時(shí)間），為研究者提供了快速進(jìn)入藥物測(cè)試或轉(zhuǎn)錄因子對(duì)HR的影響的途徑。

HR修復(fù)報(bào)告基因試劑盒包含在任何動(dòng)物細(xì)胞系中創(chuàng)建完整的同源重組報(bào)告系統(tǒng)所需的試劑。

I-Sce1基因表達(dá)質(zhì)粒，pSCE1（儲(chǔ)存于-20°C或4°C）。

DR-HRGFP（儲(chǔ)存于-20°C或4°C）。這個(gè)質(zhì)粒含有一個(gè)普魯霉素選擇基因。

eGFP（帶有CMV啟動(dòng)子的野生型GFP）轉(zhuǎn)染對(duì)照（儲(chǔ)存于-20°C或4°C）。

對(duì)于所有質(zhì)粒，DNA濃度通常為0.5微克/微升（但需在管標(biāo)簽上核實(shí)）。請(qǐng)注意，目錄編號(hào)表示試劑盒大小，這是基于DNA的量。

可選：為了幫助建立系統(tǒng)，我們提供含有單個(gè)GFP修復(fù)報(bào)告基因的對(duì)照HeLa細(xì)胞系（穩(wěn)定整合到基因組中），該細(xì)胞系在轉(zhuǎn)染I-Sce1質(zhì)粒后將進(jìn)行DNA修復(fù)（形成GFP+細(xì)胞）（請(qǐng)咨詢）。

試劑盒可能通過(guò)干冰或濕冰運(yùn)輸，或者在某些情況下可能在常溫下運(yùn)輸。所有試劑在收到后應(yīng)儲(chǔ)存在4°C（短期）或-20°C（長(zhǎng)期）。

艾美捷科技是TopoGEN的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。