干貨分享 | In Vivo 同型對照抗體—對照實驗的秘密武·器 | MCE

什么是同型對照抗體？一定要用嗎？用 PBS 替代是否可行？同型對照抗體該怎么選？




Tips：

• 對照抗體包括陽性對照抗體和陰性對照抗體。

• 陰性對照抗體一般為同型對照抗體。

• 陽性對照抗體一般為已進入臨床研究或者臨床已經(jīng)獲批被證明有效的抗體。

01
什么是同型對照抗體？

同型對照抗體 (Isotype control antibody) 通常用于在體外和體內(nèi)準(zhǔn)確檢測抗體藥物作用和功效，評估非特異性結(jié)合或背景信號。它們與研究抗體 (實驗抗體) 有相同的類別和亞類，但是它們與目標(biāo)靶點無特異性結(jié)合。

圖 1. 用作陰性對照的同型對照抗體。 

 MCE 同型對照抗體：

• MCE 同型對照抗體專門為動物體內(nèi)實驗研究定制，已經(jīng)在體內(nèi)藥效研究中成功通過驗證。

• MCE 同型對照抗體是以 Hen egg lysozyme / HA protein of H7N9 / trinitrophenol 為抗原在 CHO 細胞中表達的重組抗體?？乖鞍自谌伺c小鼠中均不存在，從而避免了發(fā)生交叉反應(yīng)。

• MCE 同型對照抗體在低內(nèi)毒素條件下生產(chǎn)，并通過了嚴(yán)格的質(zhì)量控制。每個同型對照抗體都能適用于多方面的應(yīng)用，如作為體內(nèi)陰性對照，流式抗體等。

02
為何使用同型對照抗體？

在進行體內(nèi)藥效評價和體外免疫檢測實驗時，同型對照抗體的作用至關(guān)重要：

• 評估非特異性結(jié)合：由于抗體與靶細胞上的 Fc 受體結(jié)合，如 B 細胞、樹突狀細胞、NK 細胞及巨噬細胞等，可能導(dǎo)致假陽性^[1]。因此，同型對照抗體可以幫助排除由待測抗體的 Fc 與 FcR 結(jié)合導(dǎo)致對療效分析可能產(chǎn)生的影響；

• 優(yōu)化實驗條件：不清楚表達情況的時候，特別是確定某種抗原是否在細胞表達以及相應(yīng)表達含量時，一定要用同型對照來界定陰性；

• 確保結(jié)果的準(zhǔn)確性：它們是實驗結(jié)果可靠性的保證。

圖 2. 抗體 Fc 介導(dǎo)的效應(yīng)器功能^[1]。

03
PBS 是否可作同型對照抗體的“平替”？

同型對照抗體作為體內(nèi)療效的重要工具，為準(zhǔn)確評價抗體藥物效應(yīng)提供適當(dāng)?shù)年幮詫φ?。與同型對照進行比較，可以避免對抗體功效產(chǎn)生高估或低估，對于下游結(jié)果的免疫分析和數(shù)據(jù)分析非常重要。
PBS 作為對照（如 PBS）可能會導(dǎo)致數(shù)據(jù)的假陽性。而高質(zhì)量的同型對照抗體可以準(zhǔn)確區(qū)分精準(zhǔn)藥物開發(fā)分析的特異性與背景。
04
同型對照抗體選擇原則？

1. 種屬來源相同 – Mouse, Rat, Human；
2. 亞型相同 – IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3；
3. 亞鏈相同 – kappa, lambda;
4. 濃度劑量相同 – 對照抗體的使用濃度或劑量應(yīng)與實驗抗體相同或相似；
5. 抗體質(zhì)量 – 選擇高純度、低內(nèi)毒素的同型對照抗體。
IgG 亞類在小鼠模型和人類中 差異最·大。人 IgG 同種型由四個亞類 (IgG1、IgG2、IgG3 和 IgG4) 組成，每個亞類包含不同的重鏈。在小鼠中，IgG 亞型分為五個亞類 (IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c 和 IgG3)。在大鼠中，有四個亞類 (IgG1、 IgG2a、IgG2b、IgG2c)。

圖 3. 流式細胞術(shù)以 Mouse IgG2a 作為陰性對照^[2]。 

使用抗原特異性抗體與同型對照抗 (a)，而用 KLH 蛋白免疫小鼠產(chǎn)生的同型對照抗體不結(jié)合 (b)。用抗原特異性鼠抗人 CD4 抗體對人 PBMC 染色時，可檢測到陽性熒光信號，而用相應(yīng)的鼠 IgG2a 同型對照抗體則檢測不到陽性信號。

 詢價與訂購：

MCE 為廣大客戶提供高質(zhì)量，高純度的同型對照抗體，經(jīng) SDS-PAGE，SEC-HPLC 驗證純度大于 95%，內(nèi)毒素小于 1 EU/mg，可用于體內(nèi)研究。

 參考文獻：
[1] Schmid AS, et al. Advances in antibody engineering for rheumatic diseases. Nat Rev Rheumatol. 2019 Apr;15(4):197-207.

[2] Hammerbeck, C. et al. Primary and Secondary Antibodies and Flow Cytometry Controls. In: Flow Cytometry Basics for the Non-Expert. Techniques in Life Science and Biomedicine for the Non-Expert. Springer, Cham. 2018.