高效標(biāo)記與細(xì)胞內(nèi)分布Molday ION羅丹明B熒光標(biāo)記物

由Benjamin Addicott等人發(fā)表于2010年的《Mesenchymal stem cell labeling and in vitro MR characterization at 1.5T of new SPIO contrast agent: Molday ION Rhodamine-B》，主要探討了新型超順磁性氧化鐵（SPIO）對(duì)比劑Molday ION Rhodamine-B（MIRB）在標(biāo)記間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）方面的應(yīng)用，并通過(guò)體外MRI實(shí)驗(yàn)評(píng)估了其成像特性。

方法

本研究采用了一種由Biopal公司研發(fā)的新型SPIO造影劑——Molday ION Rhodamine-B（MIRB）(BPL-CL-50Q01-6A-50，BPL-CL-50Q02-6A-50)，對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）進(jìn)行了標(biāo)記，并在1.5T臨床MRI設(shè)備上進(jìn)行了體外成像特性研究。研究?jī)?nèi)容包括：

細(xì)胞培養(yǎng)：從食蟹猴（Macaca fascicularis）的髂嵴采集骨髓單核細(xì)胞，通過(guò)密度梯度離心法分離并擴(kuò)增MSC。

細(xì)胞標(biāo)記：將MSC與不同濃度的MIRB共孵育20小時(shí)，濃度范圍從5到100mg Fe/ml。通過(guò)普魯士藍(lán)染色和熒光顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)MIRB的分布，并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)標(biāo)記效率。

MSC功能評(píng)估：通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)、基因表達(dá)分析、T細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)以及成骨、成脂分化實(shí)驗(yàn)，評(píng)估MIRB標(biāo)記對(duì)MSC活力、增殖能力、表型及功能的影響。

MRI成像：構(gòu)建含有MIRB標(biāo)記MSC的瓊脂糖模型，使用T2加權(quán)梯度回波（GE）、T2加權(quán)快速自旋回波（FSE）和T2加權(quán)平衡穩(wěn)態(tài)自由進(jìn)動(dòng)（bSSFP）序列進(jìn)行MRI掃描，評(píng)估不同序列對(duì)MIRB標(biāo)記MSC的檢測(cè)能力。

艾美捷Molday ION羅丹明B熒光標(biāo)記物的d特優(yōu)勢(shì)：

高效標(biāo)記與細(xì)胞內(nèi)分布：MIRB能夠被非吞噬性細(xì)胞高效內(nèi)化，標(biāo)記效率在MIRB濃度達(dá)到或超過(guò)20mg Fe/ml時(shí)接近95%。MIRB主要定位于MSC細(xì)胞質(zhì)的核周內(nèi)體中，這種定位模式有助于MRI檢測(cè)時(shí)產(chǎn)生強(qiáng)烈的磁敏感效應(yīng)。

對(duì)細(xì)胞功能無(wú)顯著影響：研究表明，在MIRB濃度高達(dá)30mg Fe/ml時(shí)，MSC的活力、增殖能力、表型以及成骨、成脂分化能力均未受到顯著影響。此外，MIRB標(biāo)記的MSC在抑制T細(xì)胞增殖方面也表現(xiàn)出與未標(biāo)記MSC相似的能力。

優(yōu)異的MRI檢測(cè)性能：在體外MRI實(shí)驗(yàn)中，使用長(zhǎng)TR/TE、低帶寬和低翻轉(zhuǎn)角的梯度回波序列能夠最大限度地提高MIRB標(biāo)記MSC的檢測(cè)靈敏度。研究發(fā)現(xiàn)在1.5T MRI設(shè)備上，MIRB標(biāo)記的MSC在細(xì)胞數(shù)量低至約1000個(gè)時(shí)仍能被清晰檢測(cè)到，顯示出j高的檢測(cè)靈敏度。

多模態(tài)成像能力：MIRB不僅適用于MRI檢測(cè)，還因其共軛了羅丹明B（Rh-B）熒光染料而具備熒光顯微鏡檢測(cè)能力。這種多模態(tài)成像能力為科研人員提供了更多元的細(xì)胞追蹤手段。

MIRB在干細(xì)胞治療中的價(jià)值：

精準(zhǔn)追蹤：MIRB的高標(biāo)記效率和優(yōu)異的MRI檢測(cè)性能使得科研人員能夠精準(zhǔn)地追蹤移植后的干細(xì)胞，評(píng)估其在體內(nèi)的分布、遷移及存活情況。

功能評(píng)估：通過(guò)MRI監(jiān)測(cè)干細(xì)胞的功能變化，如分化狀態(tài)、增殖能力等，為干細(xì)胞治療的效果評(píng)估提供重要依據(jù)。

安全性：MIRB對(duì)干細(xì)胞功能無(wú)顯著影響，表明其在干細(xì)胞治療中具有良好的生物相容性和安全性。

結(jié)論

本研究證明了MIRB作為一種新型SPIO造影劑，在間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記及MRI檢測(cè)中的z越表現(xiàn)。MIRB不僅能夠高效標(biāo)記干細(xì)胞且對(duì)細(xì)胞功能無(wú)顯著影響，還具備j高的MRI檢測(cè)靈敏度。這些特性使得MIRB成為干細(xì)胞治療中一種j具潛力的細(xì)胞追蹤工具。未來(lái)，隨著MIRB在更多臨床前和臨床試驗(yàn)中的應(yīng)用，其有望在干細(xì)胞治療領(lǐng)域發(fā)揮更大的作用，推動(dòng)該領(lǐng)域的快速發(fā)展。

通過(guò)本文的研究，我們不僅展示了MIRB在MSC標(biāo)記和MRI檢測(cè)中的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，還進(jìn)一步強(qiáng)調(diào)了Biopal品牌產(chǎn)品在干細(xì)胞追蹤領(lǐng)域的重要價(jià)值和廣闊應(yīng)用前景。