羊口蹄疫亞Ⅰ型病毒抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）工作原理

羊口蹄疫亞Ⅰ型病毒抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

使用說(shuō)明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名：羊口蹄疫亞Ⅰ型病毒抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Sheep Foot and Mouth Disease Virus Asia Ⅰ （ELISA）

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

【預(yù)期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus，F(xiàn)MDV）引起的偶蹄動(dòng)物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，其特征為口腔黏膜、蹄部、乳房皮膚發(fā)生水泡和爛斑。

本試劑用于檢測(cè)羊血清中口蹄疫病毒亞Ⅰ抗體，可用于口蹄疫病毒亞Ⅰ疫苗免疫效果評(píng)價(jià)。

【原    理】

    本試劑盒由預(yù)包被口蹄疫病毒亞Ⅰ型抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測(cè)羊血清樣本中口蹄疫病毒亞Ⅰ型抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入待檢樣本和抗體工作液，經(jīng)溫育后洗滌除去未結(jié)合的其他成分后；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加TMB底物液，若樣品中含有口蹄疫病毒亞Ⅰ型抗體則將阻斷抗體工作液與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，從而使后續(xù)反應(yīng)不出現(xiàn)顯色；反之則出現(xiàn)顯色；顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負(fù)相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值， 即可知樣品是否含有口蹄疫病毒亞Ⅰ型抗體。

【試劑盒組成】 

【儲(chǔ)存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個(gè)月。

    包被板開封后請(qǐng)于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個(gè)月。

【適用儀器】 含450nm、630nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。

【樣品準(zhǔn)備】

1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無(wú)溶血、無(wú)污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長(zhǎng)期需置-20℃保存。

2.待檢血清樣本恢復(fù)室溫、混勻待用。陰、陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。

【檢驗(yàn)方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)陰性/陽(yáng)性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照50μl；樣品孔每孔先加入45μl工作洗滌液,再加入5μl血清樣本。

4.每孔加抗體工作液50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃（推薦水?。┍芄夥磻?yīng)30分鐘。

5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加350μl工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，最后一次拍干。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)15分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng)）測(cè)定各孔吸光值（A值）

【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陰性對(duì)照吸光值≥0.8，陽(yáng)性對(duì)照吸光值≤陰性對(duì)照吸光值×50%。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

1. PI（阻斷率）=（1- 陰性對(duì)照平均A值(樣本A值)）×100%，PI≥50%為陽(yáng)性；PI＜50%為陰性。

2.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性時(shí)表明抗體水平不足，建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗。

【試驗(yàn)方法的局限性】

    該試驗(yàn)僅作為定性檢測(cè)羊血清中口蹄疫病毒亞Ⅰ型抗體，根據(jù)PI值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評(píng)估。

【注意事項(xiàng)】

1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來(lái)水沖洗。

3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以溶解。

5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。

7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

8.不同批號(hào)試劑組分不得混用。