α-淀粉酶測(cè)定試劑盒 (Ceralpha Method)原理與使用

α-Amylase Assay Kit (Ceralpha Method)
α-淀粉酶測(cè)定試劑盒
貨號(hào)：K-CERA
規(guī)格：100 assays per kit

作品簡(jiǎn)介:
微生物α-淀粉酶在谷物制品淀粉改性和谷物加工中有著廣泛的應(yīng)用。谷物及其制品中內(nèi)源性α-淀粉酶的水平對(duì)這些商品的工業(yè)化開發(fā)具有重要影響。在制作面包時(shí)，α-淀粉酶的含量必須足以產(chǎn)生可被酵母吸收和利用的糖類，但又不能高到導(dǎo)致淀粉過(guò)度糊化，從而導(dǎo)致面包屑粘稠和加工過(guò)程中的問題。在釀酒行業(yè)，麥芽α-淀粉酶水平是麥芽品質(zhì)的重要指標(biāo)。α-淀粉酶還可作為青貯飼料添加劑，幫助淀粉降解，從而為細(xì)菌生長(zhǎng)提供可發(fā)酵糖。細(xì)菌、真菌和谷物α-淀粉酶都可以用淀粉酶HR試劑測(cè)定，但需要修改測(cè)定條件（特別是pH）以適應(yīng)每種特定的酶。淀粉酶HR試劑是α-淀粉酶特異性試劑。該底物對(duì)β-淀粉酶、淀粉葡糖苷酶和α-葡糖苷酶等外泌酶具有絕對(duì)的抗性。

原則:
用于α-淀粉酶測(cè)定的Ceralpha程序（使用淀粉酶HR試劑）采用定義的低聚糖“非還原端阻斷對(duì)硝基苯基麥芽糖苷”（BPNPG7）作為底物，存在過(guò)量的耐熱性α-葡萄糖苷酶（由于“阻斷基團(tuán)”的存在，它對(duì)天然底物沒有作用）。在內(nèi)作用α-淀粉酶水解低聚糖時(shí)，混合物中過(guò)量的α-葡萄糖苷酶使對(duì)硝基苯麥芽糖片段瞬間定量水解為葡萄糖和游離對(duì)硝基酚。

從本質(zhì)上講，在規(guī)定的條件下，將谷物面粉提取物或發(fā)酵液的等分物與底物混合物孵育，并通過(guò)添加弱堿性溶液終止反應(yīng)（并產(chǎn)生顏色）。測(cè)量400 nm處的吸光度（先前的吸光度值是在410 nm處測(cè)量的，與文獻(xiàn)值一致，但真正的吸收峰是在400 nm處），這與分析樣品中α-淀粉酶的水平直接相關(guān)。
淀粉酶HR混合試劑可用于谷物、真菌和細(xì)菌α-淀粉酶的定量測(cè)定。隨著耐熱性α-葡萄糖苷酶取代淀粉葡萄糖苷酶和酵母α-葡萄糖苷酶（如存在于原始Ceralpha試劑混合物中），該檢測(cè)現(xiàn)在可以在更寬的pH范圍（5.2至7.0）和高達(dá)60°C的溫度下使用。使用該試劑，谷物α-淀粉酶活性的最佳pH值為5.2-5.4。在此pH范圍內(nèi)，淀粉酶HR試劑對(duì)谷物α-淀粉酶的活性值與含淀粉葡萄糖苷酶和α-葡萄糖苷酶的Ceralpha試劑在pH 5.2下的活性值基本相同。以阻斷對(duì)硝基苯基麥芽糖苷為底物的試劑混合物不能區(qū)分真菌、谷物和細(xì)菌α-淀粉酶。

準(zhǔn)確性:
標(biāo)準(zhǔn)誤差通常小于5%。

KITS:
Kits suitable for performing 100  assays are available from Megazyme and consist of: 
1. Full assay method
2. Freeze dried BPNPG7 plus thermostable α-glucosidase
3. Concentrated Extraction Buffer
4. Concentrated Stopping Reagent
5. Control Malt Flour

特異性:
該試驗(yàn)對(duì)α-淀粉酶具有絕對(duì)特異性。