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DNA甲基化詳解

來源:上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司   2024年12月16日 14:35  

一、表觀遺傳與甲基化DNA甲基化是最早被發(fā)現(xiàn)、也是研究最深入的表觀遺傳調(diào)控機(jī)制之一。DNA甲基化:在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的作用下,基因組CpG二核苷酸的胞嘧啶(C)5'碳位共價(jià)鍵結(jié)合一個(gè)甲基基團(tuán)。DNA甲基化能引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變,從而控制基因表達(dá)。二、甲基化研究方法目前研究中常用的DNA甲基化測序方法包括全基因組(WGBS)、簡化基因組(RRBS)、靶向基因組(液相捕獲)、甲基化DNA免疫沉淀(MeDIP-seq)和芯片等,適用于多種不同應(yīng)用場景。1、甲基化發(fā)現(xiàn)階段Illumina EPIC 芯片(935K):全面覆蓋CpG島、啟 動(dòng)子等,還包括 島外的CpG位點(diǎn),已知的DMR位點(diǎn)全基因組甲基化測序(WGBS):全 基 因 組 覆 蓋 甲 基 化 和 非 甲 基 化甲基化捕獲測序(MC-seq):啟動(dòng)子、已知的DMRs、CpG 島、shores簡化基因組甲基化測序(RRBS):CpG島、啟動(dòng)子甲基化DNA免疫沉淀(MeDIP-seq)2、甲基化驗(yàn)證階段焦磷酸測序:焦磷酸測序技術(shù)(pyrosequencing)是一種新型的酶聯(lián)級(jí)聯(lián)測序技術(shù),可在一次檢測中快速定量一個(gè)或多個(gè)甲基化位點(diǎn),其可重復(fù)性和精確性能與SangerDNA測序法相媲美,是目前理想的驗(yàn)證方法。同時(shí),焦磷酸測序技術(shù)產(chǎn)品具備對(duì)大量樣品進(jìn)行測序分析的能力,為大通量、低成本、適時(shí)、快速、直觀地進(jìn)行甲基化分析和臨床檢驗(yàn)提供了平臺(tái)。

多重目的區(qū)域甲基化富集測序:多重目的區(qū)域甲基化富集測序,是在全基因組甲基化水平的觀察與研究后,對(duì)于眾多目的基因的甲基化水平的重要研究手段,更有針對(duì)性和大樣本可行性。使用亞硫酸氫鹽處理DNA后,結(jié)合目的區(qū)域富集和二代測序技術(shù),利用多重目的區(qū)域甲基化富集測序技術(shù)實(shí)現(xiàn)個(gè)性化目的區(qū)域甲基化測序,同時(shí)大大降低了研究費(fèi)用。

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