ELISA酶標(biāo)儀的檢測(cè)單位和檢測(cè)值計(jì)算

ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法簡(jiǎn)稱酶標(biāo)法，是標(biāo)記技術(shù)中的一種，是從熒光抗體技術(shù)，同位素免疫技術(shù)發(fā)展而來的一種敏感，特異，快速并且能自動(dòng)化的現(xiàn)代技術(shù)。 

酶標(biāo)法的基本原理是將抗原或抗體與酶用膠聯(lián)劑結(jié)合為酶標(biāo)抗原或抗體，此酶標(biāo)抗原或抗體可與固相載體上或組織內(nèi)相應(yīng)抗原或抗體發(fā)生特異反應(yīng)，并牢固地結(jié)合形成仍保持活性的免疫復(fù)合物。當(dāng)加入相應(yīng)底物時(shí)，底物被酶催化而呈現(xiàn)出相應(yīng)反應(yīng)顏色。顏色深淺與相應(yīng)抗原或抗體含量成正比。

 由于此技術(shù)是建立在抗原-抗體反應(yīng)和酶的高效催化作用的基礎(chǔ)上，因此，具有高度的靈敏性和特異性，是一種極富生命力的免疫學(xué)試驗(yàn)技術(shù)。

光通過被檢測(cè)物，前后的能量差異即是被檢測(cè)物吸收掉的能量，特定波長(zhǎng)下，同一種被檢測(cè)物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。

檢測(cè)單位用OD值表示， OD是optical density（光密度）的縮寫，表示被檢測(cè)物吸收掉的光密度， OD=log（1/trans），其中trans為檢測(cè)物的透光值。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則，OD值與光強(qiáng)度成下述關(guān)系：

E=OD=log(lo/Ι) 其中E表示被吸收的光密度， Ιo 為在檢測(cè)物之前的光強(qiáng)度，Ι為從被檢測(cè)物出來的光強(qiáng)度。

OD值由下述公式計(jì)算：

c為檢測(cè)物的濃度 b為檢測(cè)物的厚度 a為摩爾因子。

在特定波長(zhǎng)下測(cè)定每一種物質(zhì)都有其特定的波長(zhǎng)，在此波長(zhǎng)下，此物質(zhì)能夠吸收最多的光能量。如果選擇其它的波長(zhǎng)段，就會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此，在測(cè)定檢測(cè)物時(shí)，我們選擇特定的波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，稱為測(cè)量波長(zhǎng)。

但是每一種物質(zhì)對(duì)光能量還存在一定的非特異性吸收，為了消除這種非特異性吸收，我們?cè)龠x取一個(gè)參照波長(zhǎng)，以消除這個(gè)不準(zhǔn)確性。在參照波長(zhǎng)下，檢測(cè)物光的吸收最小。檢測(cè)波長(zhǎng)和參照波長(zhǎng)的吸光值之差可以消除非特異性吸收。

儀器中的檢測(cè)器接收透過被檢測(cè)物的光能量，轉(zhuǎn)換成二進(jìn)位數(shù)字信號(hào)，最大為4095。儀器定義沒有光源下的透光值為 0%，沒有檢測(cè)物的透光值為100%。則實(shí)際檢測(cè)中，檢測(cè)物的透光值均在 0%一100%之間。

透光值的計(jì)算如下：

T=（Meas—Min）/（Max—Min）

其中T為透光值， Meas為檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值， Min為在 0%的情況下檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值， Max為在100%的情況下檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值，舉例如下：

MaX=3600

Min=20

Meas=30

T=（30-20）/3600-20)=0．0028

OD=log（1/T）=log（1/0.0028）=2.552