Hamilton MagPip技術(shù)實現(xiàn)小體積反應(yīng)的高速度高質(zhì)量自動化移液

MagPip移液通道是Hamilton公司推出的一種創(chuàng)新性的移液技術(shù)。簡而言之，移液通道的柱塞不再由任何機械連接(如主軸或皮帶)驅(qū)動而由線圈驅(qū)動。此技術(shù)設(shè)計可以使活塞擁有巨大的速度和加速度。這將因此可以使用一種稱為WhiPip分液的新型分液模式來無接觸地分裝小體積液體。使用WhiPip分液，移液非常精確，可降到350nL的量，且體積每孔均可自由調(diào)節(jié)。更小的體積意味著你可以節(jié)約使用珍貴的樣品和試劑。此外，WhiPip分液模式可以優(yōu)化和簡化工作流程，減少吸頭消耗。同時，該移液通道具有非常廣泛的移液量程（350nl-750ul），從而可以很大程度提升相關(guān)實驗的吸放液設(shè)計，提高工作效率。   

在本應(yīng)用中，通過 TaqMan™ qPCR構(gòu)建展示了MagPip的優(yōu)勢。與常規(guī)移液平臺相比，MagPip通道低容量移液使總PCR體積減少50%成為可能。盡管移取體積降至0.3µL，但qPCR分析結(jié)果顯示具有非常高的精密度和可靠性。

體積更?。盒◇w積用量節(jié)省貴重樣品和試劑

移液步驟更少：簡化移液工作流程

更少的吸頭消耗：WhiPip技術(shù)允許小體積分裝，不接觸試劑

高質(zhì)量：精確的移液可獲得高質(zhì)量的結(jié)果

工作流程

為了確認(rèn)MagPip技術(shù)的精密度，我們使用配備8x MagPip通道的STAR V對15份生物樣本和1份水對照品進行TaqMan™qPCR。通過分析3個差異表達基因揭示采用WhiPip分液技術(shù)的移液精密度。

使用WhiPip分配模式，我們能夠移取三種不同基因的TaqMan™ qPCR反應(yīng)，而不制備主混合物。將MagPip的移液程序與標(biāo)準(zhǔn)通道進行比較，可以清楚地看到工作流程的改進。

MagPip無需使用主混合物，減少了移液步驟、移液時間和死體積。概述見表1。

在移液方案的第一步中，使用帶有WhiPip多次分配噴射模式的單個300µL吸頭將2.1µL ddH2O分配到384孔板的240個目標(biāo)孔中。因此，一次就可以移取135個單獨的樣本分裝。采用相同的移液程序，僅使用一個300µL吸頭可以將3µL 2x Applied Biosystems™TaqMan™基因表達主混合物分配至240個目標(biāo)孔中。此后，將用于分析三種不同基因的0.3µL TaqMan™探針移液至80個目標(biāo)孔中，使用10µL吸頭以獲得更好的移液精密度。每個探針只需要1個吸頭。移液也是在WhiPip多點噴射模式下進行的。最后，將來自15個生物樣品的0.6µL cDNA[濃度10 ng/µL]， （cDNA由C57BL/6小鼠大腦分離的RNA產(chǎn)生）和一個水對照物用WhiPip多分配模式移液至15個孔中。每孔各一個。這允許每個樣本使用一個吸頭進行所有15次重復(fù)。移液布局如圖所示。

結(jié)果

為了確認(rèn)MagPip技術(shù)的精確度，對15個生物樣本的3個差異表達基因的基因表達進行了一式五份的評估。因此，在Novartis Pharma AG使用ThermoFisher QuantStudio 7Pro實時PCR系統(tǒng)分析上述TaqMan™qPCR反應(yīng)混合物。使用QuantStudio Design & Analysis 2.6軟件進行結(jié)果分析。

通過MagPip技術(shù)，我們能夠非常精確地移取不同的樣本組，也采用了低體積試劑方法。一式五份CT值的標(biāo)準(zhǔn)差范圍為SD±0.11至SD±0.43。在生物醫(yī)學(xué)研究所對這些樣本集進行移液和分析，發(fā)現(xiàn)SD值在相同范圍內(nèi)。此外，不同一式五份樣品的變異系數(shù) (CV) 在0.44%和2.24%之間，平均值的CV=0.98%。