光學(xué)顯微鏡觀察方式之相稱觀察

光學(xué)顯微鏡觀察方式中的相稱觀察，通常指的是相差觀察（Phase Contrast Observation），它是一種增加對比度的方法，可以在不染色的情況下看到活體細胞。以下是對相稱（相差）觀察的詳細介紹：

一、原理

相稱（相差）顯微鏡利用光的衍射和干涉現(xiàn)象，將透過標(biāo)本的光線光程差或相位差轉(zhuǎn)換成肉眼可分辨的振幅差。人的眼睛能夠識別明與暗之差（光的強度）和顏色不同（光的波長不同），但難以識別差別小的無色的透明物體。光對無色透明物體（相位物體）并不引起明、暗和顏色的變化，而只產(chǎn)生所謂的相位差。可是這種相位差不能用肉眼識別，也就看不見這種相位物體。相差顯微鏡利用阿貝成像原理，把相位變化轉(zhuǎn)化為振幅變化，是觀察透明物體的關(guān)鍵。

相差光路比普通光學(xué)顯微鏡多了兩個元件：環(huán)形光闌（annular diaphragm）和相位板（annular phaseplate）。利用位相差聚光鏡及內(nèi)部位相環(huán)所構(gòu)成的環(huán)狀光圈，產(chǎn)生中空光錐通過聚光鏡、穿過檢體，經(jīng)過物鏡內(nèi)的光延遲位環(huán)板而成，因檢體折射指數(shù)不同，造成繞射光束與直射光束發(fā)生干涉作用，得到明暗對比的效果。調(diào)整位相差裝置，先選擇聚光鏡上與物鏡相同倍率之位相差環(huán)，所形成的亮環(huán)與物鏡內(nèi)的暗環(huán)配合，調(diào)整聚光鏡上亮環(huán)，使之重疊即可。

二、特點

無需染色：相差觀察可以在不染色的情況下觀察活體細胞，避免了染色過程對細胞的潛在損傷。

高對比度：通過相位差的轉(zhuǎn)換，使得原本難以分辨的透明物體變得清晰可見，提高了圖像的對比度。

廣泛應(yīng)用：相差觀察廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域，特別是在細胞生物學(xué)、組織學(xué)、胚胎學(xué)等研究中發(fā)揮著重要作用。

三、應(yīng)用

細胞觀察：相差顯微鏡能夠清晰地觀察細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和動態(tài)變化，如細胞分裂、細胞運動等。

胚胎發(fā)育：在胚胎發(fā)育研究中，相差顯微鏡能夠觀察胚胎的形態(tài)變化、細胞分化和組織形成等過程。

組織切片：相差顯微鏡也適用于觀察組織切片，特別是那些未經(jīng)染色的透明組織切片。

四、注意事項

調(diào)整光路：在進行相差觀察時，需要仔細調(diào)整光路，確保環(huán)形光闌和相位板的位置正確，以獲得Z佳的圖像效果。

選擇合適的物鏡：不同的物鏡具有不同的放大倍數(shù)和分辨率，需要根據(jù)觀察對象的大小和細節(jié)程度選擇合適的物鏡。

避免振動：相差顯微鏡對振動非常敏感，因此在使用過程中需要避免振動和干擾，以確保圖像的穩(wěn)定性。

綜上所述，相稱（相差）觀察是光學(xué)顯微鏡中一種重要的觀察方式，它能夠在不染色的情況下清晰地觀察活體細胞和透明物體，為科學(xué)研究提供了有力的工具。