皖儀科技液相色譜對2025年版《中國藥典》黃芪和檳榔公示稿中赭曲霉毒素A的檢測

前言

在國家藥典委修訂的2025年版《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)草案中，黃芪和檳榔標(biāo)準(zhǔn)草案中增訂了赭曲霉毒素A的檢查項(xiàng)。在修訂草案的公示稿中對于供試品的制備，與2020年版《中國藥典》2351赭曲霉毒素A測定法中供試品溶液的制備有較大差異，差異如下：

本次實(shí)驗(yàn)參考了2025年版《中國藥典》黃芪和檳榔的修訂草案公示稿，采用皖儀科技高效液相色譜儀LC3200系列配置熒光檢測器進(jìn)行檢測。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，理論塔板數(shù)以赭曲霉毒素A峰算遠(yuǎn)高于藥典要求4000，目標(biāo)峰周圍無雜峰，滿足系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求。對照品赭曲霉毒素A保留時(shí)間重復(fù)性RSD為0.075%，峰面積重復(fù)性為0.421%，重復(fù)性較好。曲線測試R值在0.999以上。赭曲霉毒素A的檢出限為2.366ng。以上數(shù)據(jù)均滿足藥典方法的要求。

關(guān)鍵詞：黃芪；檳榔；高效液相色譜法；熒光檢測器；赭曲霉毒素A。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1 儀器配置

1.２實(shí)驗(yàn)材料及輔助設(shè)備

乙腈：色譜純；

甲醇：色譜純；

冰乙酸：優(yōu)級純；

赭曲霉毒素A標(biāo)準(zhǔn)品：100mg/L；

聚山梨酯20：分析純；

氯化鈉：優(yōu)級純；

磷酸氫二鈉：優(yōu)級純；

磷酸二氫鉀：優(yōu)級純；

氯化鉀：優(yōu)級純；

鹽酸：優(yōu)級純；

赭曲霉毒素A免疫親和柱；

離心機(jī)。

1.3測試條件

1.4溶液配制

1.4.1 PBS緩沖液

稱取氯化鈉8.0g、磷酸氫二鈉1.2g、磷酸二氫鉀0.2g、氯化鉀0.2g，加水990mL使溶解，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.0，加水稀釋至1000mL，即得。

1.4.2 聚山梨酯20 PBS緩沖液

取聚山梨酯20 1.0mL，加PBS緩沖液稀釋至1000mL，即得。

1.4.3對照品溶液

精密量取赭曲霉毒素A對照品適量，用甲醇制成濃度為每1mL含2.5ng的溶液，即得。

1.4.4供試品溶液的制備  

取供試品粉末約3g，精密稱定，置于均質(zhì)瓶中，加入氯化鈉3g，精密加入70%甲醇60mL，離心10分鐘（離心速度8000r/min），精密量取上清液5mL，置于50mL量瓶中，用PBS緩沖液稀釋至刻度，搖勻，離心15分鐘（離心速度8000r/min），精密量取上清液20mL，通過免疫親和柱，流速每分鐘3mL，用聚山梨酯20 PBS緩沖液10mL沖洗，棄去洗脫液，使空氣進(jìn)入柱子，再用水10mL洗脫，流速每分鐘6mL，棄去洗脫液，使空氣進(jìn)入柱子，將水?dāng)D出柱子，再用甲醇1.5mL洗脫，收集洗脫液，置2mL量瓶中，并用水稀釋至刻度。

２ 結(jié)果與討論

２.1 系統(tǒng)適用性

說明：由上述譜圖可見，理論塔板數(shù)以赭曲霉毒素A峰算遠(yuǎn)高于藥典要求4000，目標(biāo)峰周圍無雜峰，滿足系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求。

２.２ 對照品重復(fù)性測試

說明：由上表數(shù)據(jù)可知，赭曲霉毒素A保留時(shí)間重復(fù)性RSD為0.075%，峰面積重復(fù)性為0.421%，重復(fù)性較好，滿足實(shí)驗(yàn)要求。

2.3 曲線測試

說明：赭曲霉毒素A對照品濃度為2.5μg/L，分別進(jìn)樣5μL，10μL，15μL，20μL，25μL。由上圖數(shù)據(jù)可知，曲線方程R值為0.999以上，滿足實(shí)驗(yàn)要求。

2.4 檢出限測試

說明：由上表數(shù)據(jù)可知，赭曲霉毒素A濃度為2.5μg/L，進(jìn)樣量5μL，可得進(jìn)樣質(zhì)量為12.5ng。由三倍信噪比為檢出限可得赭曲霉毒素A的檢出限為2.366ng。滿足實(shí)驗(yàn)要求。

2.5 黃芪和檳榔測試結(jié)果

說明：由黃芪加標(biāo)譜圖中可以表明，黃芪譜圖中的峰不是赭曲霉毒素A，黃芪和檳榔中未檢測出赭曲霉毒素A，且在空白實(shí)驗(yàn)及空白前處理實(shí)驗(yàn)也未檢測出未知峰，黃芪和檳榔譜圖中的未知峰應(yīng)是樣品中未知物。

2.6 注意事項(xiàng)

1. 免疫親和柱需在2-8℃冰箱中保存，不可冷凍；

2. 赭曲霉毒素A標(biāo)準(zhǔn)品需在-20±5℃下保存。

３ 結(jié)論

本次實(shí)驗(yàn)參考了2025年版《中國藥典》黃芪和檳榔的修訂草案公示稿，采用皖儀科技高效液相色譜儀LC3200系列配置熒光檢測器進(jìn)行檢測。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，理論塔板數(shù)以赭曲霉毒素A峰算遠(yuǎn)高于藥典要求4000，目標(biāo)峰周圍無雜峰，滿足系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求。對照品赭曲霉毒素A保留時(shí)間重復(fù)性RSD為0.075%，峰面積重復(fù)性為0.421%，重復(fù)性較好。曲線測試R值在0.999以上。赭曲霉毒素A的檢出限為2.366ng。以上數(shù)據(jù)均滿足藥典方法的要求。