產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Lezol是一種自主研發(fā)和生產(chǎn)的用于細(xì)胞或組織的總RNA提取試劑，Lezol采用與Invitrogen TRIzol相似的原理和方法，Lezol顏色、抽提的方法和步驟亦與InvitrogenTRIzol相同。Lezol含酚和異硫氰酸胍等物質(zhì)，能迅速裂解細(xì)胞或組織并且滅活核酸酶，保持RNA的完整性，加入氯仿并離心后，溶液形成上清層為水相(無色)、中間層、下層為有機(jī)相(紅色)，上清層用異丙醇沉淀回收總RNA，中間層用乙醇沉淀回收DNA，下層用異丙醇沉淀回收蛋白。

 Lezol適用于從各種組織或細(xì)胞中快速分離總RNA，既可用于小量樣品(50～100mg組織、5×106細(xì)胞)，也可用于大量樣品(>1g組織/>107細(xì)胞)。提取的總RNA質(zhì)量高，可用于Northern blot、Dot blot、polyA篩選、體外翻譯、RNase保護(hù)分析和分子克隆，Lezol具有以下特點(diǎn)：①適用范圍廣；②操作簡(jiǎn)單，整個(gè)過程1小時(shí)內(nèi)完成；③純度高；④污染少。該試劑僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：

1、試劑：無水乙醇、氯仿、異丙醇、DEPC處理水等。

2、耗材： RNase 廣泛存在于人的皮膚上和體液及環(huán)境中，RNase 是導(dǎo)致RNA降解的最主要物質(zhì)，非常穩(wěn)定。操作時(shí)應(yīng)佩戴一次性口罩、手套、帽子。塑料制品、玻璃和金屬物品、 實(shí)驗(yàn)儀器等應(yīng)清除 RNase，移液器吸頭、EP管等制品的 RNase free 處理尤為重要。

3、儀器：低溫高速離心機(jī)、低溫冰箱。

操作步驟(僅供參考)：

1、樣品準(zhǔn)備(1)貼壁細(xì)胞：

①接裂解：直接在培養(yǎng)瓶/皿中加入Lezol 裂解細(xì)胞，每10cm² 面積加 1ml  Lezol，用移液器吹打混勻。

②胰蛋白酶消化：用無菌 PBS 洗滌細(xì)胞后，加入含有0.05～0.25%胰蛋白酶的 PBS 處理細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞脫離容器壁后，加入含有血清的培養(yǎng)基終止反應(yīng)，將細(xì)胞溶液轉(zhuǎn)移至無RNase的離心管中，5000～6000g 離心5min，收集細(xì)胞沉淀，去除上清。收集細(xì)胞時(shí)一定要將細(xì)胞培養(yǎng)液去除干凈，否則裂解不，降低 RNA 收獲率。

⑵懸浮細(xì)胞：無需清洗細(xì)胞，直接5000～6000 g 離心5min，收集細(xì)胞，每5×106～107動(dòng)物、植物和酵母細(xì)胞或每107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml Lezol。

⑶組織：取新鮮動(dòng)物或者植物組織或者-70℃凍存組織，50～100mg 組織在液氮中充分研磨或者加入1ml Lezol 研磨或者用勻漿器勻漿處理，樣品體積一般不超過 Lezol體積的10%。研磨要迅速，以1min為佳。

⑷血液：取0.5～1 ml 新鮮或凍存的血液，12000g 離心 5min，去除血漿，加入 1ml Lezol， 充分振蕩混勻。

2、核酸分離：充分振蕩混勻(可以置于低溫/超低溫冰箱凍存 5～10 min 后，充分振蕩，反復(fù) 1～3 次)，將裂解樣品或勻漿液室溫放置 5～10min，使核蛋白與核酸分離。

3、樣品分層：加入 0.2 ml氯仿/1ml Lezol，劇烈振蕩 15 s，室溫放置 2～3 min，置于 4℃ 離心機(jī)，12000 g 離心 10～15 min；上層為水相，中間層和下層為有機(jī)相，RNA 在上層水相。

4、沉淀 RNA：吸取上層水相(約 500μl)轉(zhuǎn)移至無 RNase 的離心管中(不要吸取任何中間層物質(zhì),否則會(huì)有染色體DNA 污染)，加入等體積異丙醇混勻(或者加入1.2 倍體積 Trizol 專用 RNA 沉淀液，超低溫冰箱放置 2～3hr,可以大大提高 RNA 回收率），室溫放置 15～20 min，12000 g 4℃離心 10 min，離心后管側(cè)或管底形成膠狀沉淀，棄上清。

5、洗滌 RNA：加入 1ml DEPC 水配制的 75%乙醇/1ml Lezol 洗滌沉淀(或者加入 1ml  Trizol 專用 RNA 洗滌液，可以大大提高 RNA 純度），室溫放置 5～10 min， 7500g 4℃離心 5 min，棄上清，室溫干燥 5～10 min，不宜過分干燥，否則 RNA 難以溶解。

6、溶解 RNA：加入 30～50ul RNase-free ddH₂O 充分溶解 RNA，-70℃長(zhǎng)期保存或直接用于后續(xù)試驗(yàn)。對(duì)于肝、胰腺、腎等組織中 RNase 含量高的樣品，沉淀時(shí)用 100% 去離子甲酰胺溶解。

分析與定量：

1、測(cè)定樣品在 260 nm 和 280 nm 的吸收值確定 RNA 的質(zhì)量，按 1OD=40pg RNA 計(jì)算RNA 的產(chǎn)率，OD_260/280 在 1.8～2.0 視為抽提 RNA 純度較好，濃度在 4μg/ml 以上的樣品適于用分光光度計(jì)測(cè)定。

   2、進(jìn)行甲醛變性瓊脂糖電泳，確定 RNA 的完整性和污染情況。

   3、核酸分析儀測(cè)定 RNA 的質(zhì)量和純度。

注意事項(xiàng)：

   1、樣品保存：加入 Lezol 混勻后，樣品可在-70℃放置 1～2月；RNA 樣品可以在 70%酒精中-70℃保存 2～4周：如果需要長(zhǎng)期保存，應(yīng)置于超低溫冰箱中保存。

   2、Lezol 是強(qiáng)腐蝕性物質(zhì)，污染皮膚或眼睛后，立即用清水或生理鹽水沖洗，必要時(shí)尋求醫(yī)生的幫助。

   3、Lezol 可常溫運(yùn)輸，建議保存 4℃保存。

   4、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：12個(gè)月有效。