鬼筆環(huán)肽-iFluor 555偶聯(lián)物，高分辨率研究肌動蛋白在細胞中的分布

這種橙色的熒光鬼筆環(huán)肽綴合物（相當于Alexa Fluor®555標記的鬼筆環(huán)蛋白）選擇性結(jié)合F-actins。以納摩爾濃度使用，鬼筆環(huán)肽衍生物是標記、鑒定和定量甲醛固定和滲透組織切片、細胞培養(yǎng)或無細胞實驗中F-actins的方便探針。Phalloidin與肌動蛋白絲的結(jié)合比與肌動蛋白單體的結(jié)合更緊密，導致肌動蛋白亞基從絲端解離的速率常數(shù)降低，基本上通過防止絲解聚來穩(wěn)定肌動蛋白絲。此外，發(fā)現(xiàn)鬼筆環(huán)肽抑制F-actin的ATP水解活性。Phalloidin在細胞中不同濃度下的作用不同。當以低濃度引入細胞質(zhì)時，鬼筆環(huán)肽將聚合程度較低的細胞質(zhì)肌動蛋白和絲蛋白募集到聚集的肌動蛋白聚合物的穩(wěn)定“島”中，但它不會干擾應(yīng)力纖維，即粗的微絲束。鬼筆環(huán)肽的性質(zhì)是一種有用的工具，可以通過用熒光類似物標記鬼筆環(huán)蛋白并將其用于在光學顯微鏡下染色肌動蛋白絲來研究F-肌動蛋白在細胞中的分布。鬼筆環(huán)肽的熒光衍生物已被證明在活細胞或固定細胞中定位肌動蛋白絲以及在體外可視化單個肌動蛋白絲方面非常有用。熒光鬼筆環(huán)肽衍生物已被用作高分辨率研究肌動蛋白網(wǎng)絡(luò)的重要工具。AAT Bioquest提供各種不同顏色的熒光鬼筆環(huán)肽衍生物，用于多色成像應(yīng)用。

艾美捷鬼筆環(huán)肽-iFluor 555偶聯(lián)物：

貨號 AAT-23119

偶聯(lián)物：iFluor 555

單位大小：300次測試

目錄編號：23100、23101、23102、23103、23110、23111、23115、23116、23117、23119、23122、23125

分子量：~1300

溶劑：DMSO

校正因子（260納米）：0.23

校正因子（280納米）：0.14

消光系數(shù)（cm -1 M -1）：100000

激發(fā)（納米）：557

發(fā)射（納米）：570

量子產(chǎn)率：0.64

預(yù)期用途：僅供研究使用（RUO）

儲存條件：冷凍（<-15°C）；盡量減少光照

協(xié)議概要：

在微孔板孔中準備樣品

從板中的樣品中移除液體

加入Phalloidin-iFluor™ 555偶聯(lián)溶液（每孔100 μL）

在室溫下對細胞進行20至90分鐘的染色

洗滌細胞：

在顯微鏡下使用TRITC濾光片檢查樣本

重要事項     在打開前將瓶加熱至室溫并短暫離心。

儲存和處理條件：

如果儲存在-20°C，溶液至少穩(wěn)定6個月。保護熒光偶聯(lián)物不受光線影響，并避免凍融循環(huán)。

注意     Phalloidin有毒，盡管一瓶中的毒素量可能只對蚊子致命（Phalloidin的LD50 = 2 mg/kg），應(yīng)小心處理。

工作溶液的準備：

Phalloidin-iFluor™ 555偶聯(lián)工作溶液

將1 μL的Phalloidin-iFluor™ 555偶聯(lián)溶液加入到含1% BSA的PBS中，制成1 mL的工作溶液。

注意     Phalloidin偶聯(lián)物的庫存溶液應(yīng)分裝并儲存在-20°C，避免光線照射。

注意     不同細胞類型可能染色不同。應(yīng)相應(yīng)準備Phalloidin偶聯(lián)工作溶液的濃度。

樣品實驗協(xié)議

染色細胞：

進行甲醛固定。在室溫下用含3.0-4.0%甲醛的PBS孵育細胞10-30分鐘。

注意     避免使用含甲醇的固定劑，因為甲醇可能會在固定過程中破壞肌動蛋白。s選的固定劑是無甲醇的甲醛。

用PBS沖洗固定細胞2-3次。

可選：將0.1% Triton X-100加入PBS中，用于固定細胞3至5分鐘以增加通透性。用PBS沖洗細胞2-3次。

將Phalloidin-iFluor™ 555偶聯(lián)工作溶液（100 μL/孔，96孔板）加入到固定細胞中，并在室溫下對細胞進行20至90分鐘的染色。

在將細胞板封蓋和在顯微鏡下使用TRITC濾光片組進行成像之前，用PBS輕輕沖洗細胞2至3次以去除多余的Phalloidin偶聯(lián)物。

圖：用4%甲醛固定的HeLa細胞的熒光圖像，然后分別用Phalloidin iFluor®555偶聯(lián)物（Cat#23119，紅色）和Nuclear Blue™DCS1（Cat#17548，藍色）染色。

鬼筆環(huán)肽-iFluor 555偶聯(lián)物文獻參考：

LSD1 deficiency in breast cancer cells promotes the formation of pre-metastatic niches

Authors: Yao, Yutong and Qian, Rui and Gao, Hanwei and Dai, Yonghao and Shi, Yueru and An, Peipei and Xin, Benkai and Liu, Ziyu and Zhang, Nan and Wan, Youzhong and others,

Journal: npj Precision Oncology (2024): 260

ROS-Responsive and Self-Catalytic Nanocarriers for a Combination of Chemotherapy and Reinforced Ferroptosis against Breast Cancer

Authors: Zhang, Beibei and Liu, Hao and Wang, Yifei and Zhang, Yong

Journal: ACS Biomaterials Science \& Engineering (2024)

LSD1 inhibits the invasion and migration of breast cancer through exosomes

Authors: Zhang, Nan and Chen, Zhongyu and Xin, Benkai and Shi, Yueru and Yao, Yutong and Yang, Jingtong and Wang, Xiaoyu and Hu, Xin

Journal: Scientific Reports (2024): 20817

Meis1 Targets Protein Tyrosine Phosphatase Receptor J in Fibroblast to Retard Chronic Kidney Disease Progression

Authors: Bai, Mi and Xu, Shuang and Jiang, Mingzhu and Guo, Yuxian and Hu, Dandan and He, Jia and Wang, Ting and Zhang, Yu and Guo, Yan and Zhang, Yue and others,

Journal: Advanced Science (2024): 2309754

Patterning in stratified epithelia depends on cell--cell adhesion

Authors: Mai, Yosuke and Kobayashi, Yasuaki and Kitahata, Hiroyuki and Seo, Takashi and Nohara, Takuma and Itamoto, Sota and Mai, Shoko and Kumamoto, Junichi and Nagayama, Masaharu and Nishie, Wataru and others,

Journal: Life Science Alliance (2024)