鈣黃綠素,AM：細(xì)胞活力和膜完整性的雙重檢測(cè)

鈣黃綠素 AM 是一種能滲透細(xì)胞的染料，可用于測(cè)定大多數(shù)真核細(xì)胞的活力。 在活細(xì)胞中，細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解乙酰氧甲酯之后，非熒光的鈣黃綠素 AM 轉(zhuǎn)化為綠色熒光鈣黃綠素。

艾美捷超級(jí)純鈣黃綠素,AM：

貨號(hào)：AAT-22003

等級(jí)：超純

分子量：994.86

溶劑：DMSO（二甲基亞砜）

消光系數(shù)（cm -1 M -1）：81000

激發(fā)（納米）：501

發(fā)射（納米）：521

H-短語(yǔ)：H303, H313, H333

危險(xiǎn)符號(hào)：XN

預(yù)期用途：僅限研究使用（RUO）

R-短語(yǔ)：R20, R21, R22

儲(chǔ)存：冷凍（< -15 °C）；盡量減少光照暴露

激發(fā)：488 納米激光

發(fā)射：530, 30 納米濾光片

儀器規(guī)格(S)：FITC通道

激發(fā)：490

發(fā)射：525

截止：515

推薦板：黑色壁，透明底

儀器規(guī)格(S)：底部讀取模式

激發(fā)和發(fā)射

Calcein-AM是一種非熒光化合物，分子量為994.86道爾頓。它被非特異性的細(xì)胞內(nèi)酯酶水解成calcein。Calcein是一種熒光化合物，激發(fā)峰值為501納米，發(fā)射峰值為521納米。在流式細(xì)胞儀中，可以用488納米激光激發(fā)并在FITC通道讀取。在熒光板讀數(shù)器中，可以使用Ex/Em = 490/525納米的設(shè)置，并在515納米處設(shè)置截止濾光片。

毒性

Calcein AM的安全數(shù)據(jù)表指出，它是一種非危險(xiǎn)化學(xué)品或混合物。在生命科學(xué)和藥物發(fā)現(xiàn)研究中，由于其相對(duì)較低的細(xì)胞毒性，calcein AM通常用于研究酶活性、細(xì)胞活力、膜完整性和長(zhǎng)期細(xì)胞追蹤。然而，對(duì)于特定的細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)條件，高濃度的calcein AM顯示出對(duì)細(xì)胞的毒性。

Calcein AM能否固定？

簡(jiǎn)單地說(shuō)，不，calcein AM是不可固定的。無(wú)論使用何種固定方法——醛類或甲醇固定——用calcein AM染色的細(xì)胞都會(huì)失去它們的染色模式。此外，calcein AM不能用于固定細(xì)胞，因?yàn)樗鼈內(nèi)狈?span style="font-family: Calibri;">calcein AM轉(zhuǎn)化為calcein所需的酯酶和保留染料所需的膜完整性。Calcein AM是一種熒光原酯酶底物，只能用于活細(xì)胞以確定細(xì)胞活力。

Calcein AM能染色細(xì)菌嗎？

Calcein AM染色不僅適用于真核樣本，還可用于確定細(xì)菌樣本的細(xì)胞活力。Calcein AM適用于檢測(cè)許多活的革蘭氏陰性細(xì)菌菌株，可用于微生物學(xué)研究、環(huán)境監(jiān)測(cè)、藥品無(wú)菌性測(cè)試和食品及植物評(píng)估技術(shù)。與真核細(xì)胞一樣，細(xì)菌在其細(xì)胞質(zhì)中含有微生物酯酶，可以裂解calcein AM的疏水阻斷基團(tuán)，并將它們轉(zhuǎn)化為熒光的calcein。信號(hào)可以使用熒光儀器測(cè)量，其強(qiáng)度與存在的活細(xì)菌數(shù)量成正比。

如何配制calcein溶液？

Calcein及其衍生物calcein AM通常作為凍干固體供應(yīng)，必須在加載到細(xì)胞之前在溶液中重懸，通常是DMSO。要配制calcein或calcein AM的庫(kù)存溶液，請(qǐng)?jiān)诟哔|(zhì)量的無(wú)水DMSO中重懸染料，使?jié)舛却蠹s為1毫克/毫升。例如，向50微克的calcein AM中加入50微升的DMSO將得到1毫克/毫升的庫(kù)存溶液。

對(duì)于calcein AM，需要將庫(kù)存溶液進(jìn)一步稀釋到水性緩沖液中（例如，HBSS），然后才能加載到細(xì)胞中。作為水性溶液，calcein AM容易水解，應(yīng)在一天內(nèi)使用。

什么是calcein AM的陽(yáng)性和陰性對(duì)照？

陽(yáng)性對(duì)照：這是一群在正常培養(yǎng)環(huán)境中生長(zhǎng)的健康、未經(jīng)處理的細(xì)胞。健康、未經(jīng)處理的細(xì)胞含有水解calcein AM成熒光產(chǎn)物的細(xì)胞內(nèi)酯酶和保留染料的完整質(zhì)膜。用calcein AM染色陽(yáng)性對(duì)照將導(dǎo)致細(xì)胞在藍(lán)光激發(fā)下發(fā)出綠色熒光。

陰性對(duì)照：這是一群死亡細(xì)胞，通常用乙醇或甲醛固定。死亡細(xì)胞不含有細(xì)胞內(nèi)酯酶，因此無(wú)法將非熒光的calcein AM底物轉(zhuǎn)化為熒光的calcein產(chǎn)物。用calcein AM染色的陰性對(duì)照不會(huì)產(chǎn)生熒光信號(hào)。

在進(jìn)行calcein AM細(xì)胞活力測(cè)定時(shí)，執(zhí)行目標(biāo)樣本時(shí)，擁有適當(dāng)?shù)年?yáng)性和陰性對(duì)照非常重要，以便跟蹤報(bào)告結(jié)果的變化和相似性。所有對(duì)照應(yīng)來(lái)自與目標(biāo)樣本相同的培養(yǎng)。

Calcein AM能染色死亡或壞死的細(xì)胞嗎？

不，calcein AM不染色死亡或壞死的細(xì)胞，因?yàn)樗鼈內(nèi)狈⒎菬晒獾?span style="font-family: Calibri;">calcein AM轉(zhuǎn)化為熒光calcein所需的酶（例如，非特異性細(xì)胞內(nèi)酯酶）。

Calcein AM染色協(xié)議

簡(jiǎn)要總結(jié)

準(zhǔn)備庫(kù)存溶液（2至5毫摩爾）

準(zhǔn)備工作溶液（1至10微摩爾）

準(zhǔn)備細(xì)胞成像

去除細(xì)胞培養(yǎng)基并洗滌細(xì)胞

將工作溶液加入培養(yǎng)中

在37°C下孵化（30至60分鐘）

替換工作溶液以去除多余的探針