柑橘病害會(huì)影響葉子和果實(shí)的健康,由于其癥狀影響,繼續(xù)對(duì)柑橘種植者的生產(chǎn)力和經(jīng)濟(jì)穩(wěn)定構(gòu)成威脅。黃龍病 (HLB) 或柑橘綠化病對(duì)柑橘樹是致命的,且缺乏治愈方法,并已多次復(fù)發(fā),造成樹木毀壞 。它是一種普遍存在的威脅,由細(xì)菌病原體引起,會(huì)在葉片、莖和果實(shí)上引起壞死性病變。受感染的葉片形狀不規(guī)則、發(fā)育不良或起皺。嚴(yán)重的感染會(huì)導(dǎo)致不良后果,如葉片脫落、果實(shí)過(guò)早脫落、樹枝腐爛、整棵樹衰弱以及果實(shí)上出現(xiàn)斑點(diǎn)。由柑橘球腔菌引發(fā)的油斑病和由柑橘黑斑病引起的柑橘黑斑病也使柑橘樹面臨著一系列挑戰(zhàn)。由真菌引起的瘡痂病對(duì)檸檬品種、朗布爾酸橙和粗糙檸檬砧木構(gòu)成了明顯威脅,導(dǎo)致果實(shí)、葉片和樹枝上出現(xiàn)類似瘡痂或疣的不規(guī)則突起,常伴有葉片扭曲。在佛羅里達(dá)州,缺鋅最初表現(xiàn)為葉片綠色葉脈之間出現(xiàn)小黃斑,逐漸發(fā)展為除綠色葉脈區(qū)域外的整體變黃,缺鋅情況會(huì)逐漸惡化。柑橘病害不僅影響產(chǎn)量,颶風(fēng)、冬季霜凍、小雪、雨夾雪和凍雨等惡劣天氣條件以及勞動(dòng)力短缺也會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)量下降。因此,確保柑橘的盈利能力和市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力的關(guān)鍵在于對(duì)受感染水果的有效控制和識(shí)別??煽?、準(zhǔn)確地檢測(cè)病害感染至關(guān)重要,因?yàn)檫@些可以通過(guò)人為干預(yù)來(lái)預(yù)防,而天氣條件則無(wú)法控制。然而,一般的檢測(cè)方法依賴于人工檢查,這容易出現(xiàn)人為錯(cuò)誤,或者依賴于電子顯微鏡或聚合酶鏈反應(yīng)等傳統(tǒng)方法,這些方法既耗時(shí)又昂貴,而且需要實(shí)驗(yàn)室技能。在考慮病害檢測(cè)的長(zhǎng)期最終策略時(shí),需要能夠以更快的速度準(zhǔn)確、不知疲倦地對(duì)柑橘病害進(jìn)行分類的自動(dòng)化系統(tǒng)。
大多數(shù)關(guān)于葉片病害檢測(cè)方法的研究都側(cè)重于利用圖像分類和識(shí)別技術(shù)的視覺(jué)或彩色數(shù)字成像。HSI 系統(tǒng)已被證明是一種可靠、準(zhǔn)確且無(wú)損的方法,可以進(jìn)行高光譜分辨率的深入光譜分析。此外,熒光成像系統(tǒng)已被廣泛用于評(píng)估植物葉片在環(huán)境壓力或病害條件下的生理特性。當(dāng)特定波長(zhǎng)激發(fā)葉綠素分子時(shí),葉綠素會(huì)發(fā)出不同波長(zhǎng)范圍的光。這些光譜特征可以在寬光譜范圍內(nèi)表征疾病的存在,得益于 HSI 的能力,這些光譜特征可以執(zhí)行疾病檢測(cè)和分類任務(wù) 。先前的研究已經(jīng)探索了多光譜檢測(cè)以評(píng)估柑橘病害對(duì)葡萄柚的影響,分類準(zhǔn)確率達(dá)到 95.7% 。這項(xiàng)研究展示了雙波段多光譜成像的潛力。Thomas 等人還探索了一種結(jié)合反射和透射的高光譜成像系統(tǒng)來(lái)研究植物病原體。他們的發(fā)現(xiàn)表明,基于反射率的測(cè)量有助于早期檢測(cè),而透射率測(cè)量則為理解和量化植物-病原體相互作用的復(fù)雜時(shí)空動(dòng)態(tài)提供了補(bǔ)充見(jiàn)解。 Bauriegel 和 Herppich 利用高光譜和葉綠素?zé)晒獬上裣到y(tǒng)對(duì)小麥赤霉病進(jìn)行了早期檢測(cè) 。他們?cè)趯?shí)驗(yàn)室環(huán)境中使用高光譜成像系統(tǒng)測(cè)量鐮刀菌,在田間使用葉綠素?zé)晒獬上裣到y(tǒng)測(cè)量鐮刀菌?,F(xiàn)有的高光譜和熒光系統(tǒng)需要復(fù)雜的設(shè)置和單獨(dú)操作,導(dǎo)致數(shù)據(jù)收集時(shí)間更長(zhǎng),并且需要手動(dòng)對(duì)齊數(shù)據(jù),從而降低準(zhǔn)確性。
此外,準(zhǔn)確區(qū)分健康葉片和受感染葉片或具有相似可見(jiàn)癥狀的葉片疾病仍然是一項(xiàng)具有挑戰(zhàn)性的任務(wù)。近年來(lái),包括支持向量機(jī) (SVM)、k 最近鄰 (KNN)、人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò) (ANN) 和卷積神經(jīng)網(wǎng)絡(luò) (CNN) 在內(nèi)的機(jī)器學(xué)習(xí)方法加速并推進(jìn)了自動(dòng)化系統(tǒng)的發(fā)展,并在疾病檢測(cè)任務(wù)中取得了可喜的成果 。在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域,HSI 與機(jī)器學(xué)習(xí)相結(jié)合已被證明是一種高度準(zhǔn)確的方法,可用于檢測(cè)和分類各種葉片上的疾病,如柑橘 、葡萄、紅樹林、南瓜等。謝等人利用 HSI 檢測(cè)番茄葉片上的疾病,并應(yīng)用了全光譜的極限學(xué)習(xí)機(jī) (ELM) 模型以及針對(duì)選定波長(zhǎng)的連續(xù)投影算法 (SPA)-ELM。在測(cè)試數(shù)據(jù)中,ELM 模型的準(zhǔn)確率 (100%) 高于 SPA-ELM 模型 (97.1%)。SPA-ELM 方法具有模型簡(jiǎn)化、計(jì)算時(shí)間短以及開(kāi)發(fā)基于多光譜的檢測(cè)儀器的潛力。吳等采用 ELM、SVM 和 KNN 的反射率 HSI 檢測(cè)草莓葉片上的灰霉病。三種機(jī)器學(xué)習(xí)分類器在測(cè)試集中的準(zhǔn)確率超過(guò) 90%。劉等還展示了將反射率 HSI 與機(jī)器學(xué)習(xí)模型結(jié)合使用在評(píng)估蘋果葉片上與蘋果花葉病相關(guān)的葉綠素含量方面的潛力。使用基于多種波長(zhǎng)、平均葉片葉綠素含量及其組合的隨機(jī)森林模型從驗(yàn)證數(shù)據(jù)集獲得了最高的準(zhǔn)確率(98.89%)。陳等研究了一種帶有機(jī)器學(xué)習(xí)模型的熒光成像系統(tǒng),即一種采用 ResNet50 進(jìn)行遷移學(xué)習(xí)的卷積神經(jīng)網(wǎng)絡(luò),用于識(shí)別受黃瓜霜霉病感染的葉片。植物因病害應(yīng)激而產(chǎn)生的葉綠素?zé)晒鈪?shù)為植物的生理特性提供了寶貴的信息。這些參數(shù)被用作深度學(xué)習(xí)模型的輸入,增強(qiáng)型 ResNet 模型的準(zhǔn)確率達(dá)到了 94.76%,有助于早期疾病檢測(cè)。Weng 等人使用三個(gè) 650 nm 的 LED 對(duì)柑橘 HLB 葉片進(jìn)行了葉綠素?zé)晒鉁y(cè)量。最小二乘支持向量機(jī)對(duì)臍橙的準(zhǔn)確率達(dá)到 95.0%,對(duì)無(wú)核小蜜柑的準(zhǔn)確率達(dá)到 96%。
雖然已經(jīng)有大量研究?jī)H研究基于反射或熒光的高光譜測(cè)量,但對(duì)于在單一系統(tǒng)中同時(shí)使用反射和熒光成像來(lái)識(shí)別葉片疾病的潛在用途的研究卻非常有限。同時(shí)使用高光譜反射和熒光成像可以帶來(lái)區(qū)分疾病的優(yōu)勢(shì)(例如,分類準(zhǔn)確度高)。本研究探索了便攜式高光譜反射和熒光成像系統(tǒng)與機(jī)器學(xué)習(xí)相結(jié)合在區(qū)分柑橘葉片上各種疾病方面的潛力。使用高光譜成像系統(tǒng)測(cè)試了感染六種不同疾病的葉子的正面和背面以及健康對(duì)照組。使用機(jī)器學(xué)習(xí)分類器研究了高光譜葉片圖像。
材料和方法
2.1. 便攜式高光譜成像系統(tǒng)
本研究開(kāi)發(fā)了一種便攜式高光譜成像系統(tǒng)。該系統(tǒng)由兩個(gè) LED 光源組成:用于反射的可見(jiàn)光和近紅外 (VNIR) 寬帶光,以及用于熒光的紫外線 A (UV-A) 激發(fā)光。VNIR LED 的波長(zhǎng)設(shè)置為 428、650、810、850、890、910 和 940 nm,而 UV-A 的波長(zhǎng)設(shè)置為 365 nm??梢允褂脙蓚€(gè)數(shù)字調(diào)光控制器調(diào)整 LED 強(qiáng)度,每個(gè)控制器管理三個(gè)通道。第一個(gè)控制器處理 365、428 和 650 nm 的波長(zhǎng),而第二個(gè)控制器管理 810、850、890、910 和 940 nm 的波長(zhǎng)。線光束由棒焦透鏡產(chǎn)生,聚焦在樣品架上的葉子樣品上,并與垂直位置傾斜 6° 重疊。樣品架設(shè)計(jì)尺寸為 254 × 197 × 15 mm 3,由 3D 打印機(jī)用黑色熱塑性塑料打印而成。定制的反射標(biāo)準(zhǔn)面板尺寸為 254 × 32 × 15 mm 3側(cè)面安裝在樣品架上,用于對(duì)反射圖像進(jìn)行平場(chǎng)校正。使用微型線掃描高光譜相機(jī)和焦距 5 mm 的廣角鏡頭以及長(zhǎng)通(> 400 nm)明膠濾光片采集反射和熒光信號(hào),相機(jī)由成像光譜儀和 CMOS 焦平面陣列探測(cè)器組成。長(zhǎng)通濾光片用于消除 UV-A 激發(fā)的二階效應(yīng)。為了阻擋環(huán)境光,使用尺寸為 56×36×56 cm3 的鋁框外殼和黑色鋁復(fù)合板來(lái)封閉 LED 燈、相機(jī)、樣品架、反射板和移動(dòng)臺(tái),而電源和控制器安裝在外面。這些組件(即兩盞燈、一臺(tái)相機(jī)和一個(gè)載物臺(tái))通過(guò)一個(gè)有源四端口 USB 集線器連接到筆記本電腦。整個(gè)系統(tǒng)安裝在一個(gè)緊湊的 45 × 60 cm2光學(xué)面包板上,適合現(xiàn)場(chǎng)和野外實(shí)驗(yàn)。
圖 1. 用于柑橘葉面病害檢測(cè)的便攜式高光譜成像系統(tǒng)
系統(tǒng)軟件及操作
圖2顯示了在Windows 11筆記本電腦上使用LabVIEW開(kāi)發(fā)的系統(tǒng)軟件。為了操作系統(tǒng),使用硬件制造商提供的帶有LabVIEW的軟件開(kāi)發(fā)工具包(SDK)來(lái)實(shí)現(xiàn)參數(shù)化和數(shù)據(jù)傳輸功能。SDK包括用于LED燈控制的用戶數(shù)據(jù)報(bào)協(xié)議(UDP)、用于攝像頭控制的網(wǎng)絡(luò)協(xié)議、用于平臺(tái)移動(dòng)控制的串行通信以及用于圖像和光譜顯示的LabVIEW視覺(jué)開(kāi)發(fā)模塊(VDM)。在測(cè)量過(guò)程中,VNIR線燈打開(kāi)10秒以穩(wěn)定LED輸出。然后平移臺(tái)將樣品架向左移動(dòng),而高光譜相機(jī)從標(biāo)準(zhǔn)面板收集線掃描反射信號(hào)并傳遞樣品。當(dāng)樣品架完成通過(guò)時(shí),反射圖像采集結(jié)束,并且VNIR燈關(guān)閉。隨后,UV-A線燈打開(kāi)10秒以穩(wěn)定。然后,當(dāng)平臺(tái)返回到起始位置時(shí),相機(jī)獲取線掃描熒光信號(hào),完成后關(guān)閉 UV-A 燈,從而結(jié)束一個(gè)完整的成像周期。
圖 2. 內(nèi)部開(kāi)發(fā)的系統(tǒng)控制和高光譜圖像采集軟件
對(duì)于預(yù)定的掃描距離,沿平移方向的空間分辨率取決于載物臺(tái)移動(dòng)速度和總掃描次數(shù)。例如,當(dāng)總掃描次數(shù)為 250 線、距離為 250 毫米時(shí),載物臺(tái)以 3.3 毫米/秒的速度移動(dòng),則大約需要 76 秒,從而得到近似于 1 毫米/像素的空間分辨率。根據(jù)相機(jī)的曝光時(shí)間,調(diào)整載物臺(tái)移動(dòng)速度,以使連續(xù)線掃描圖像采集與平移載物臺(tái)移動(dòng)同步。根據(jù)經(jīng)驗(yàn),確定了移動(dòng)速度(V,單位為毫米/秒)和曝光時(shí)間(T,單位為秒)之間的倒數(shù)關(guān)系(V = 0.99/T),從而當(dāng)曝光時(shí)間為 0.3 秒時(shí),速度為 3.3 毫米/秒,當(dāng)曝光時(shí)間為 0.6 秒時(shí),速度為 1.65 毫米/秒。除了連續(xù)移動(dòng)模式外,高光譜系統(tǒng)還能夠以增量逐步線掃描模式運(yùn)行。該軟件顯示反射率和熒光圖像以及原始光譜和空間輪廓,逐行更新以顯示獲取圖像時(shí)的實(shí)時(shí)掃描進(jìn)度。完成后,反射率和熒光的每幅圖像都以標(biāo)準(zhǔn)波段逐行交錯(cuò) (BIL) 格式保存到單獨(dú)的數(shù)據(jù)文件中。
樣品制備與測(cè)量
采集了瓦倫西亞橙樹的成熟葉子,這些葉子表現(xiàn)出潰瘍病、HLB、油斑病、黑素病、瘡痂病和缺鋅癥狀,每種葉子都只出現(xiàn)一種癥狀,沒(méi)有出現(xiàn)多種感染。葉子樣本經(jīng)過(guò)手工采摘并放入冷藏箱的拉鏈袋中,然后在 4 小時(shí)內(nèi)轉(zhuǎn)移到實(shí)驗(yàn)室。這些葉子在采集后 48 小時(shí)內(nèi)冷藏并拍照。植物病理學(xué)家根據(jù)對(duì)每片葉子癥狀的目視檢查來(lái)識(shí)別疾病。根據(jù)葉子大小,同時(shí)對(duì)同一類別的 4 到 16 片葉子進(jìn)行拍照。正面和背面都進(jìn)行了掃描。對(duì)照、潰瘍病、HLB、油斑病、黑素病、瘡痂病和缺鋅類別的葉子總數(shù)分別為 107、105、101、114、117、73 和 125。將柑橘葉樣品放在樣品架上。樣品架和反射板由線性電動(dòng)平臺(tái)在高光譜相機(jī)的范圍內(nèi)移動(dòng),以進(jìn)行線掃描圖像采集。鏡頭到樣品的距離固定在 285 毫米,其中沿相機(jī)掃描線方向的空間分辨率為 0.33 毫米/像素。每個(gè)相機(jī)幀捕獲 810 × 348 像素(空間 × 光譜)的感興趣區(qū)域 (ROI),以處理 270 毫米長(zhǎng)的瞬時(shí)視場(chǎng)和 395 至 1005 nm 的光譜區(qū)域。
以象科技由西安光機(jī)所光學(xué)博士團(tuán)隊(duì),行業(yè)資深專家,光譜軟件算法團(tuán)隊(duì),光學(xué)應(yīng)用博士等相關(guān)人員共同發(fā)起成立的科技型公司,目前投產(chǎn)市場(chǎng)可見(jiàn)光、近紅外、短波中紅外高光譜相機(jī),實(shí)現(xiàn)國(guó)產(chǎn)化,突破進(jìn)口技術(shù)壁壘,打破進(jìn)口短波紅外高光譜相機(jī)的技術(shù)限制。
以象科技是一家集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售于一體的科技型公司。目前經(jīng)營(yíng)產(chǎn)品有激光共聚焦,激光散斑血流成像儀,光譜儀,高光譜相機(jī)等光學(xué)產(chǎn)品。研發(fā)中心設(shè)立于西安,銷售網(wǎng)絡(luò)、完善售后服務(wù)機(jī)構(gòu)設(shè)立覆蓋全國(guó)。
以象科技作為一家由西安光機(jī)所光學(xué)博士團(tuán)隊(duì)、行業(yè)資深專家、光譜軟件算法團(tuán)隊(duì)以及光學(xué)應(yīng)用博士等多元專業(yè)力量共同發(fā)起創(chuàng)立的科技型企業(yè),在光學(xué)技術(shù)領(lǐng)域展現(xiàn)出了非凡的潛力與強(qiáng)勁的實(shí)力,正逐步成為行業(yè)內(nèi)的一顆璀璨新星。
其團(tuán)隊(duì)成員憑借深厚的學(xué)術(shù)造詣與豐富的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn),構(gòu)建起了一座堅(jiān)實(shí)的技術(shù)堡壘。西安光機(jī)所光學(xué)博士團(tuán)隊(duì)深入鉆研光學(xué)核心原理,在光學(xué)系統(tǒng)的設(shè)計(jì)、優(yōu)化以及創(chuàng)新方面持續(xù)發(fā)力,致力于打造出具有性能與高精度的光學(xué)基礎(chǔ)架構(gòu)。行業(yè)資深專家則猶如敏銳的市場(chǎng)領(lǐng)航員,他們憑借對(duì)行業(yè)發(fā)展脈絡(luò)的精準(zhǔn)把握以及對(duì)市場(chǎng)需求變化的前瞻性洞察,為公司的產(chǎn)品戰(zhàn)略布局指明方向,確保每一款產(chǎn)品都能精準(zhǔn)對(duì)接市場(chǎng)痛點(diǎn),在激烈的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)中脫穎而出。光學(xué)應(yīng)用博士則專注于探索光學(xué)技術(shù)在各個(gè)實(shí)際領(lǐng)域的落地應(yīng)用,他們深入挖掘產(chǎn)品在不同場(chǎng)景下的潛在用途,從生物醫(yī)學(xué)到工業(yè)制造,從環(huán)境監(jiān)測(cè)到農(nóng)業(yè)科技,不斷拓展產(chǎn)品的應(yīng)用邊界,讓光學(xué)技術(shù)真正造福于人類社會(huì)的各個(gè)角落。
在產(chǎn)品層面,以象科技目前已成功投產(chǎn)并推向市場(chǎng)的可見(jiàn)光、近紅外、短波中紅外高光譜相機(jī),無(wú)疑是其技術(shù)實(shí)力的集中體現(xiàn)。這不僅為國(guó)內(nèi)相關(guān)行業(yè)提供了更為可靠、性價(jià)比更高的光學(xué)設(shè)備選擇,還在一定程度上推動(dòng)了我國(guó)光學(xué)技術(shù)自主創(chuàng)新的進(jìn)程,提升了我國(guó)在全球光學(xué)產(chǎn)業(yè)價(jià)值鏈中的地位。
此外,公司經(jīng)營(yíng)的激光共聚焦、激光散斑血流成像儀、光譜儀等光學(xué)產(chǎn)品,也均在各自的領(lǐng)域內(nèi)展現(xiàn)出了優(yōu)勢(shì)與性能。激光共聚焦以其超高的分辨率和清晰的成像效果,在生物醫(yī)學(xué)微觀成像領(lǐng)域成為科研人員探索生命奧秘的得力助手;激光散斑血流成像儀能夠精準(zhǔn)地監(jiān)測(cè)微循環(huán)血流變化,為醫(yī)學(xué)臨床診斷和疾病研究提供了重要的參考依據(jù);光譜儀則憑借其對(duì)物質(zhì)光譜特性的精確分析能力,在材料成分分析、環(huán)境污染物監(jiān)測(cè)以及食品安全檢測(cè)等領(lǐng)域發(fā)揮著的作用。
以象科技秉持著集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售于一體的全產(chǎn)業(yè)鏈運(yùn)營(yíng)模式,展現(xiàn)出了強(qiáng)大的綜合實(shí)力與協(xié)同效應(yīng)。其研發(fā)中心坐落于西安這座充滿科技活力與創(chuàng)新氛圍的城市,依托當(dāng)?shù)刎S富的科研資源與人才優(yōu)勢(shì),持續(xù)不斷地投入大量資源進(jìn)行技術(shù)研發(fā)與創(chuàng)新,為公司的產(chǎn)品迭代升級(jí)和技術(shù)突破提供了源源不斷的動(dòng)力源泉。
與此同時(shí),公司精心構(gòu)建的銷售網(wǎng)絡(luò)如同一張緊密交織的大網(wǎng),全面覆蓋全國(guó)各個(gè)地區(qū),確保了產(chǎn)品能夠快速、高效地觸達(dá)每一位客戶手中。而完善的售后服務(wù)機(jī)構(gòu)則像是一位貼心的守護(hù)者,隨時(shí)為客戶提供、多層次的技術(shù)支持與售后服務(wù)保障,讓客戶在使用產(chǎn)品的過(guò)程中無(wú)后顧之憂,進(jìn)一步增強(qiáng)了客戶對(duì)公司品牌的信任度與忠誠(chéng)度。
以象科技憑借其團(tuán)隊(duì)、創(chuàng)新的產(chǎn)品以及完善的運(yùn)營(yíng)模式,在光學(xué)技術(shù)領(lǐng)域正穩(wěn)步前行,未來(lái)有望在國(guó)內(nèi)乃至全球市場(chǎng)上取得更為輝煌的成就,為推動(dòng)光學(xué)科技的進(jìn)步與應(yīng)用普及做出更多貢獻(xiàn)。
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