肽聚糖(胞壁素)ELISA試劑盒：助力微生物感染診斷與研究

肽聚糖（粘肽）ELISA試劑盒是一種用于體外定量測量生物樣本中肽聚糖濃度的ELISA試劑盒。目前處于開發(fā)階段。

艾美捷肽聚糖(胞壁素)ELISA試劑盒：

貨號(hào)：abx585338

靶標(biāo)：肽聚糖（粘肽）

反應(yīng)性：通用（所有物種）

檢測應(yīng)用：ELISA

推薦稀釋度：最終用戶應(yīng)確定最佳稀釋度/濃度。

儲(chǔ)存：運(yùn)輸時(shí)溫度為4°C。收到后，請按照試劑盒說明書中的儲(chǔ)存說明進(jìn)行儲(chǔ)存。

有效期：該試劑盒的有效期至少為6個(gè)月。根據(jù)要求可提供長達(dá)12個(gè)月的有效期。

穩(wěn)定性：試劑盒的穩(wěn)定性由活性損失率決定。在適當(dāng)?shù)膬?chǔ)存條件下，有效期內(nèi)的損失率小于5%。為了盡量減少性能波動(dòng)，操作程序和實(shí)驗(yàn)室條件應(yīng)嚴(yán)格控制。還強(qiáng)烈建議整個(gè)檢測過程由同一位用戶完成。

檢測范圍：1.23 ng/ml - 100 ng/ml

靈敏度：< 0.51 ng/ml

標(biāo)準(zhǔn)品形式：凍干

檢測方法：比色法

檢測類型：競爭法

檢測數(shù)據(jù)：定量

樣本類型：生物樣本。

靶標(biāo)類型：抗原

檢測原理：該試劑盒基于競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)技術(shù)。96孔板上預(yù)先包被有抗體。將標(biāo)準(zhǔn)品、測試樣本和生物素偶聯(lián)試劑加入到孔中并孵育。生物素標(biāo)記的粘肽和未標(biāo)記的粘肽在預(yù)包被抗體上發(fā)生競爭抑制反應(yīng)。然后加入HRP偶聯(lián)試劑，并將整個(gè)板孵育。在每個(gè)階段使用洗滌緩沖液去除未結(jié)合的偶聯(lián)物。使用TMB底物來定量HRP酶促反應(yīng)。加入TMB底物后，只有含有足夠粘肽的孔才會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，加入酸性終止液后變?yōu)辄S色。黃色的強(qiáng)度與板上結(jié)合的粘肽量成反比。在微孔板讀數(shù)儀中以450 nm波長光譜光度法測量OD，從而可以計(jì)算出粘肽的濃度。

試劑盒組成：列出的試劑盒組成僅供參考。產(chǎn)品說明書可能略有不同。產(chǎn)品應(yīng)按照隨產(chǎn)品一起提供的產(chǎn)品說明書中的說明使用。

預(yù)包被的96孔微孔板

標(biāo)準(zhǔn)品

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液

洗滌緩沖液

檢測試劑A

檢測試劑B

稀釋液A

稀釋液B

TMB底物

終止液

板封膜

所需但未提供的材料：

37°C培養(yǎng)箱

多通道和單通道移液管及無菌移液槍頭

噴霧瓶或自動(dòng)微孔板洗滌器

1.5 ml管

蒸餾水

吸水濾紙

100 ml和1升量筒

微孔板讀數(shù)儀（波長：450 nm）

ELISA振蕩器

試劑準(zhǔn)備：此程序僅供參考。

標(biāo)準(zhǔn)品：用推薦體積的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液制備標(biāo)準(zhǔn)品溶液。然后按照協(xié)議中的指示，用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液對標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行系列稀釋。

洗滌緩沖液：按照協(xié)議中的指示，用蒸餾水稀釋濃縮的洗滌緩沖液。

檢測試劑準(zhǔn)備：計(jì)算所需的工作溶液的總體積。分別用稀釋液A和稀釋液B將檢測試劑A和檢測試劑B稀釋1:100。

檢測程序：此程序僅供參考。產(chǎn)品說明書可能略有不同。產(chǎn)品應(yīng)按照隨產(chǎn)品一起提供的產(chǎn)品說明書中的說明使用。

設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品、測試樣本和對照孔。

將50 µl稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品加入到標(biāo)準(zhǔn)品孔中。

將50 µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液加入到對照（零）孔中。

將50 µl稀釋后的樣本加入到樣本孔中。

立即向每個(gè)孔中加入50 µl檢測試劑A。在37°C下孵育1小時(shí)。

洗滌3次。

向每個(gè)孔中加入100 µl檢測試劑B。在37°C下孵育30分鐘。

洗滌5次。

向每個(gè)孔中加入90 µl TMB底物。在37°C下孵育10-20分鐘。

加入50 µl終止液。

在450 nm處測量OD。

協(xié)議：此程序僅供參考。產(chǎn)品說明書可能略有不同。產(chǎn)品應(yīng)按照隨產(chǎn)品一起提供的產(chǎn)品說明書中的說明使用。 在使用前將試劑盒組分和樣本平衡至室溫（18 - 25 °C）。建議每次測試?yán)L制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

在預(yù)包被板上分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品、測試樣本和對照（零）孔，然后記錄它們的位置。建議每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣本至少重復(fù)測量兩次。

將50 µL的每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品、對照和樣本加入到相應(yīng)的孔中。

移除蓋子并丟棄液體。

立即加入50 µl檢測試劑A工作溶液。用蓋子封住板，在37°C下孵育1小時(shí)。

移除蓋子并丟棄溶液。用1X洗滌緩沖液洗滌板3次。

向每個(gè)孔中加入100 µL檢測試劑B工作溶液，封住并孵育37°C 30分鐘。

丟棄溶液并按照前一步驟用洗滌緩沖液洗滌板5次。

向每個(gè)孔中加入90 µl TMB底物。用蓋子封住板，在37°C下孵育10-20分鐘。避免暴露在光下。孵育時(shí)間僅供參考，最佳時(shí)間應(yīng)由最終用戶確定。不要超過30分鐘。

向每個(gè)孔中加入50 µL終止液。立即在450 nm處讀取。

結(jié)果計(jì)算：該檢測是競爭性的，因此樣本中粘肽濃度與測量的吸光度之間存在負(fù)相關(guān)。創(chuàng)建一個(gè)以標(biāo)準(zhǔn)濃度的對數(shù)（y軸）和平均吸光度（x軸）為坐標(biāo)的圖表。通過標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)應(yīng)用最佳擬合趨勢線。樣本的粘肽濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線上插值得出。

檢測精密度：

批內(nèi)精密度（同一批次內(nèi)的精密度）：分別在一塊板上測試3個(gè)低、中、高濃度水平的肽聚糖樣本，每個(gè)樣本測試20次。

批間精密度（不同批次之間的精密度）：在3塊不同的板上測試3個(gè)低、中、高濃度水平的肽聚糖樣本，每塊板上測試8個(gè)重復(fù)樣本。

CV（%）=（標(biāo)準(zhǔn)差/平均值）×100

批內(nèi)精密度：CV<10%

批間精密度：CV<12%

注意事項(xiàng)：本品僅限研究使用。

范圍和靈敏度可能會(huì)發(fā)生變化。為獲得準(zhǔn)確結(jié)果，樣本濃度必須稀釋至試劑盒的中等范圍。請注意，Abbexa的ELISA和CLIA試劑盒針對的是天然樣本的檢測，而不是重組蛋白。Abbexa無法保證重組蛋白的檢測，因?yàn)樗鼈兛赡芫哂信c天然蛋白不同的序列或三級(jí)結(jié)構(gòu)。

數(shù)據(jù)示例：

圖：顯示肽聚糖（Murein）標(biāo)準(zhǔn)OD數(shù)據(jù)的圖表