大鼠補(bǔ)體C3(C3)ELISA試劑盒--檢測(cè)程序和測(cè)試原理方案

Abbexa大鼠補(bǔ)體C3（C3）ELISA試劑盒是一種用于體外定量測(cè)量血清、血漿和其他生物液體中大鼠補(bǔ)體C3（C3）濃度的ELISA試劑盒。

艾美捷大鼠補(bǔ)體C3(C3)ELISA試劑盒：

貨號(hào)：abx256750

靶標(biāo)：補(bǔ)體C3（C3）  

反應(yīng)性：大鼠  

已測(cè)試應(yīng)用：ELISA  

推薦稀釋度：最終用戶應(yīng)確定最佳稀釋度/濃度。  

儲(chǔ)存：以4°C運(yùn)輸。收到后，根據(jù)試劑盒說明書中的儲(chǔ)存說明儲(chǔ)存試劑盒。  

有效期：該試劑盒的有效期至少為6個(gè)月。根據(jù)要求可提供長(zhǎng)達(dá)12個(gè)月的有效期。  

穩(wěn)定性：試劑盒的穩(wěn)定性由活性損失率決定。在適當(dāng)?shù)膬?chǔ)存條件下，到期日內(nèi)的損失率小于5%。為盡量減少性能波動(dòng)，應(yīng)嚴(yán)格控制操作程序和實(shí)驗(yàn)室條件。還強(qiáng)烈建議整個(gè)檢測(cè)過程由同一用戶完成。  

檢測(cè)范圍：7.81 ng/ml - 500 ng/ml  

靈敏度：4.69 ng/ml  

標(biāo)準(zhǔn)形式：凍干  

檢測(cè)方法：比色法  

檢測(cè)類型：夾心法  

檢測(cè)數(shù)據(jù)：定量  

樣本類型：血清、血漿和其他生物液體。  

大鼠補(bǔ)體C3(C3)ELISA試劑盒檢測(cè)原理：

該試劑盒基于夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定技術(shù)。96孔板上預(yù)先包被有抗體。將標(biāo)準(zhǔn)品、測(cè)試樣品和生物素偶聯(lián)試劑加入孔中并孵育。然后加入HRP偶聯(lián)試劑，并將整個(gè)板孵育。在每個(gè)階段使用洗滌緩沖液去除未結(jié)合的偶聯(lián)物。使用TMB底物定量HRP酶促反應(yīng)。加入TMB底物后，只有含有足夠C3的孔才會(huì)產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，加入酸性終止液后變?yōu)辄S色。黃色的強(qiáng)度與板上結(jié)合的C3量成正比。在450 nm波長(zhǎng)下用微孔板讀數(shù)器比色法測(cè)量光密度（OD），從而計(jì)算出C3的濃度。  

大鼠補(bǔ)體C3(C3)ELISA試劑盒組分：  

- 預(yù)包被的96孔微孔板  

- 標(biāo)準(zhǔn)品  

- 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液  

- 洗滌緩沖液  

- 檢測(cè)試劑A  

- 檢測(cè)試劑B  

- 稀釋液A  

- 稀釋液B  

- TMB底物  

- 終止液  

- 板封  

所需但未提供的材料：  

- 37°C培養(yǎng)箱  

- 多通道和單通道移液器及無菌移液器頭  

- 噴霧瓶或自動(dòng)微孔板洗滌器  

- 1.5 ml試管  

- 蒸餾水  

- 吸水濾紙  

- 100 ml和1升量筒  

- 微孔板讀數(shù)器（波長(zhǎng)：450 nm）  

- ELISA振蕩器  

試劑準(zhǔn)備：  

1）標(biāo)準(zhǔn)品：用推薦體積的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液制備標(biāo)準(zhǔn)品溶液。然后按照協(xié)議中的指示，用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品溶液的系列稀釋。  

2）洗滌緩沖液：按照協(xié)議中的指示，用蒸餾水稀釋濃縮洗滌緩沖液。  

3）檢測(cè)試劑準(zhǔn)備：計(jì)算所需的工作溶液總量。分別用稀釋液A和稀釋液B將檢測(cè)試劑A和檢測(cè)試劑B按1:100稀釋。  

檢測(cè)程序：

1）設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品、測(cè)試樣品和對(duì)照孔。  

2）將100 µl稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品孔中。  

3）將100 µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液加入對(duì)照（零）孔中。  

4）將100 µl稀釋后的樣品加入樣品孔中。在37°C下孵育90分鐘。  

5）將100 µl檢測(cè)試劑A加入每個(gè)孔中。在37°C下孵育1小時(shí)。  

6）洗滌3次。  

7）將100 µl檢測(cè)試劑B加入每個(gè)孔中。在37°C下孵育30分鐘。  

8）洗滌5次。  

9）將90 µl TMB底物加入每個(gè)孔中。在37°C下孵育10-20分鐘。  

10）加入50 µl終止液。  

11）在450 nm處測(cè)量OD值。  

結(jié)果計(jì)算：

對(duì)于計(jì)算，將每個(gè)參考標(biāo)準(zhǔn)品和每個(gè)樣品的O.D.450重復(fù)讀數(shù)平均，并減去平均對(duì)照（零）O.D.450讀數(shù)。可以將標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制為每個(gè)參考標(biāo)準(zhǔn)品溶液的相對(duì)O.D.450（Y）與每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的相應(yīng)濃度（X）之間的關(guān)系。樣品的C3濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值計(jì)算得出。  

檢測(cè)精密度：  

批內(nèi)精密度（同一檢測(cè)內(nèi)的精密度）：分別在一塊板上測(cè)試3個(gè)低、中、高濃度水平的補(bǔ)體C3（C3）樣品，各測(cè)試20次。  

批間精密度（不同檢測(cè)之間的精密度）：在3塊不同的板上測(cè)試3個(gè)低、中、高濃度水平的補(bǔ)體C3（C3）樣品，每塊板8個(gè)重復(fù)。  

CV（%）=（標(biāo)準(zhǔn)差/平均值）× 100  

批內(nèi)精密度：CV<10%  

批間精密度：CV<10%  

顯示大鼠補(bǔ)體C3（C3）標(biāo)準(zhǔn)OD數(shù)據(jù)的圖表