CFDA, SE 細胞增殖示蹤熒光探針檢測原理與注意事項

CFDA-SE可用于細胞示蹤，也可用于細胞增殖檢測。經(jīng)CFDA-SE標記的細胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究，且具有不會使鄰近細胞染色的功能。CFDA-SE常用于淋巴細胞的增殖檢測，也可用于成纖維細胞，自然殺傷細胞，造血祖細胞等其他細胞的增殖檢測。

檢測原理

CFDA SE可以通過完好的細胞膜，進入細胞后被細胞內(nèi)的酯酶催化分解成CFSE。CFSE可以隨機地、不可逆地和細胞內(nèi)蛋白的賴氨酸殘基或其它氨基發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，并標記這些蛋白，CFDA-SE標記細胞呈綠色熒光。CFDA-SE標記的分裂細胞每分裂一次，子代細胞的熒光會減弱一半，分裂一次的細胞熒光強度減半(1/2)，分離兩次的細胞熒光強度再減半(1/4)，以此類推，熒光強度按照1/2，1/4，1/8，1/16的規(guī)律逐漸遞減。

使用方法

1、保存液配制（5 mM）

   按需配制，如取DMSO 360 μL，溶解1 mg CFSE，超音波溶解，得到5 mM CFSE保存液,將其按40 μL體積分裝于避光的無菌凍存管中，-20℃可保存2個月。

2、工作液配制

   取 5mM 的CFSE稀釋液1μL，加入1mL10％FCS的PBS稀釋。

3、染色

   (1) 重懸細胞。用有5％ FCS的PBS重懸細胞，細胞濃度一般為1x1x10^6/mL（體外實驗）或1x1x10^7/mL（轉(zhuǎn)染實驗）。

   (2) 染色。1mL DFSE工作液與1mL細胞懸液混合后37℃孵育5~10 min。期間輕輕混勻2次。

   (3) 終止染色。用完培養(yǎng)液洗滌3次并離心。一般在第2次洗滌后再孵育5 min后進行第3次洗滌。冰冷的含10% 新生牛血清、RPMI-1640 medium（含L-谷氨酰胺）（貨號：AC01L064），輕輕混勻1 min（用手輕彈，切忌吹打），1500 r/min 離心5 min。

(4) 流式細胞儀在FL1通道檢測。

注意事項

 ? 所有試劑在使用前均需解凍、混勻，混勻過程中盡量避免產(chǎn)生氣泡；CFDA SE溶劑在較低溫度下會凝固，請于20-25℃水浴片刻至全部融化后再使用。

 ? 試劑中含有熒光染料，保存或進行標記時盡量避光操作，以避免熒光淬滅問題。

 ? 不同細胞的內(nèi)酯酶活性不同，因此染色效果具有差異性?？筛鶕?jù)細胞類型及培養(yǎng)條件摸索最佳工作濃度。

 ? 若需要對細胞進行固定，請用醛類固定劑如3.7%多聚甲醛于室溫固定15 min；之后若還需要進行其他如抗體標記，請用冰丙酮透化處理細胞10min。

 ? 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。