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人β-淀粉樣蛋白1-42（圖1）是阿爾茨海默癥(AD)患者大腦沉積斑塊的主要成分。AD病理學(xué)、診斷工具和潛在藥物的日常研究需要不間斷地供應(yīng)β-淀粉樣蛋白。但據(jù)報道，由于C末端的高疏水性，以及序列預(yù)沉積導(dǎo)致的樹脂上聚集，β-淀粉樣蛋白(1-42)難以通過傳統(tǒng)的固相多肽合成(SPPS)制備。β-淀粉樣蛋白自動合成的最新進(jìn)展包括紅外加熱和新的偶聯(lián)試劑組合，能以更短的循環(huán)時間更好地合成疑難疏水肽。本文在Symphony® X 24通道多肽合成儀平行上探索了不同合成方法下β-淀粉樣蛋白的合成效率。
使用Rink Amide ChemMatrix™ (0.47 mmol/g)和R TentaGel™樹脂(0.19 mmol/g)、PurePep™試劑：HDMA/OxymaPure™或HDMC/OxymaPure和DIPEA和預(yù)裝Fmoc氨基酸(1:1:1:2)，在Symphony® X合成儀上，按10倍過量、規(guī)模50 µmol的條件合成多肽。測試了兩種合成方法：
方法A：脫保護(hù)2 x 3 min，偶聯(lián)2 x 5 min，25°C。
方法B：脫保護(hù)2 x 30 s，90°C ，偶聯(lián)2 x 1 min，90°C，紅外加熱。
Symphony X多肽合成儀功能靈活，可同時測試5種獨(dú)立的β-淀粉樣蛋白合成條件。HDMA（表1）和HDMC（表2）各與OxymaPure試劑組合，使用Rink ChemMatrix或R TentaGel樹脂，按較慢的方法A合成β-淀粉樣蛋白，所得粗品的純度相近。最高純度來自HDMA/OxymaPure試劑和Rink Amide ChemMatrix樹脂的搭配（圖2）。
升高溫度(90°C)和加快反應(yīng)（方法B）后，HDMA/OxymaPure/DIPEA試劑與Rink Amide ChemMatrix樹脂搭配的粗品純度為33.9%。加快方法+高溫+HDMA搭配的合成純度與慢方法（表1）的相近。
表1.使用HDMA/OxymaPure/DIPEA試劑按方法A合成β-淀粉樣蛋白，所得粗品純度和產(chǎn)率。
表2.使用HDMC/OxymaPure/DIPEA試劑按方法A合成β-淀粉樣蛋白，所得粗品純度和產(chǎn)率。
12 - ?-淀粉樣蛋白 – 4.940
min
1
使用Symphony X多肽合成儀，可在24h（常溫）或17h（90℃）內(nèi)同時評測24種合成條件，并且在儀器上完成自動肽鏈切割
2
評測了6種不同合成條件（溫度、樹脂和偶聯(lián)試劑組合），初步確定了疏水肽純度和產(chǎn)率的最佳合成條件
3
使用新型多肽試劑HDMA，通過快速方法和紅外加熱(90°C)，在Symphony X多肽合成儀上成功地合成了β-淀粉樣蛋白(1-42)-NH2
4
在此基礎(chǔ)上可對疏水長鏈肽（如β-淀粉樣蛋白）合成的進(jìn)一步優(yōu)化，包括縮短偶聯(lián)時間、改用新的偶聯(lián)試劑組合
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