成品預裝培養(yǎng)基平皿在潔凈環(huán)境中的使用

成品預裝培養(yǎng)基平皿是用于獲得微生物純培養(yǎng)的的固體培養(yǎng)基，它是冷卻凝固后的固體培養(yǎng)基在無菌培養(yǎng)皿中形成的平面。培養(yǎng)基平皿常用于單孢分離、測定菌絲生長速度、觀察菌落的形態(tài)、拮抗實驗、測定潔凈空間及表面的污染水平。

　　潔凈區(qū)沉降菌的監(jiān)測依據(jù)《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測試方法》現(xiàn)行國家標準進行；浮游菌的監(jiān)測依據(jù)《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的測試方法》現(xiàn)行國家標準進行。下文著重介紹平板在潔凈環(huán)境中的使用。

　　培養(yǎng)基平皿進出潔凈區(qū)

　　1將從倉庫領入的預裝培養(yǎng)基平皿在脫外包間脫去外包，若是真空包裝，需仔細檢查包裝是否漲袋，若漲袋請勿傳進潔凈區(qū)使用；

　　2用消毒劑消毒外表面，放入傳遞窗或傳入物流緩沖間，接著紫外燈照射10~15min或根據(jù)公司文件規(guī)定操作；

　　3消毒完后，從潔凈區(qū)（D級或C級區(qū)）一側小心拿出培養(yǎng)基平皿；

　　4如果需要在B級區(qū)使用，再脫一層包裝傳入B級區(qū)；

　　5如果需要在區(qū)使用，再脫一層包裝傳入?yún)^(qū)；

　　6收集取樣后的培養(yǎng)基平皿，做好取樣信息標記，傳出潔凈區(qū)，及時放進培養(yǎng)箱培養(yǎng)，保證檢測結果準確；

　　7打開包裝后未使用的培養(yǎng)基平皿用備用呼吸袋（一般培養(yǎng)皿廠家提供）包裝好，做好標識，存放在潔凈區(qū)，下次取樣可以使用。

　　從平板進入潔凈區(qū)的流程可以看出，實驗室自制培養(yǎng)皿如果沒有特別的保護，不能用于潔凈區(qū)環(huán)境監(jiān)控。這也是2015版《中國藥典》的要求：用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應進行100%的預培養(yǎng)，以防止外來的污染物帶到環(huán)境中及避免出現(xiàn)假陽性結果。

　　2最少采樣點數(shù)目：浮游菌測試和沉降菌監(jiān)測最少采樣點數(shù)目可參考GB/T16292-2010  如下表：

　　浮游菌測試和沉降菌監(jiān)測最少采樣點數(shù)目圖

　　用于浮游菌采樣

　　3.1培養(yǎng)皿在浮游菌采樣中的使用

　　3.2浮游菌采樣注意事項

　　一般采用?90mm規(guī)格的培養(yǎng)基平皿，可根據(jù)所選用的采樣器選擇合適培養(yǎng)基平皿；

　　培養(yǎng)基需為TSA或SDA或其他用戶認可并經(jīng)過驗證；

　　培養(yǎng)基平皿在使用前應仔細檢查每一個皿的質量，有變質、污染或破損的平皿不得使用；

　　在采樣過程中，不要將任何物體（包括操作人員的手和頭）置于板皿上方，避免在取樣點附近活動。

　　用于沉降菌監(jiān)測

　　4.1采樣點布置

　　參考GB/T16294-2010附錄A潔凈區(qū)采樣點布置。

　　4.2最少培養(yǎng)基平皿數(shù)參考GB/T16294-2010

　　4.3注意事項

　　使用前必須檢查平板，若平板包裝破損或超過有效期不得使用。

　　取樣后必須盡快培養(yǎng)，以保證結果準確。

　　用于表面微生物測定

　　表面微生物測定是對環(huán)境、設備和人員的表面微生物進行監(jiān)測，方法是檢測人員打開平皿后，用培養(yǎng)基表面輕輕接觸取樣點表面，注意不要旋轉，取樣完畢后立即蓋上平皿蓋，*接觸過程大約5s，取樣結束后用消毒劑消毒取樣點或用消毒劑浸濕的無菌潔凈布擦拭取樣點。

　　表面微生物測定圖

　　以上所用樣品及其培養(yǎng)廢棄物應視為污染性的物質，應蒸汽滅菌后處理或委托有資質的第三方處理。

　　目前國內(nèi)各制藥企業(yè)環(huán)境監(jiān)測中微生物的監(jiān)測方法大多依據(jù)GB/T16293-2010醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的測試方法和GB/T16294-2010醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))沉降菌的測試方法進行。潔凈區(qū)環(huán)境浮游菌、沉降菌及表面微生物監(jiān)測用培養(yǎng)基一般采用胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA），當監(jiān)測結果有疑似真菌或考慮季節(jié)因素影響時，可增加沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（SDA），但是對于抗生素企業(yè)和部分制劑廠家來說，僅僅按照這兩個國標推薦的兩種培養(yǎng)基（TSA和SDA）來監(jiān)測潔凈區(qū)的微生物是不夠全面的，必要時可以加入適宜的中和劑。