液質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行大米農(nóng)藥殘留分析

引言AOAC QuEChERS 方法已經(jīng)廣泛應(yīng)用于食品中農(nóng)藥殘留的分析[1-2]。該方法應(yīng)用乙腈提取，再由無水硫酸鎂 (MgSO4) 脫去樣品中的水，并以醋酸鹽緩沖液促進(jìn)分配。凈化時(shí)，聯(lián)合應(yīng)用分散型固相萃取小柱與 PSA（N-丙基乙二胺）小柱以除去樣品基質(zhì)中的有機(jī)酸，再用無水硫酸鎂除去提取物中的水分。根據(jù)食品基質(zhì)的不同，在這一步驟中可以加入其他成分，如用石墨化碳黑(GCB) 去除色素和甾醇，或用 C18 去除脂肪和蠟質(zhì)。本文中，選用了適用于含脂肪和蠟質(zhì)樣品的 AOAC 分散型 SPE試劑盒。該試劑盒適用的樣品量為 1 mL，包含 PSA 50 mg、MgSO4 150 mg、C18 50 mg，可加入每毫升乙腈提取物中。本研究中，采用 12 種農(nóng)藥來評(píng)價(jià) Agilent Bond Elut AOAC 緩沖提取試劑盒 (p/n 5982-5755) 和適用于含有脂肪和蠟質(zhì)的水果和蔬菜的 Bond Elut QuEChERS AOAC 分散型 SPE 試劑盒 (p/n5982-5158) 的性能。通過回收率和重現(xiàn)性的測(cè)定進(jìn)行了方法驗(yàn)證。表 1 顯示了大米中這些殘留農(nóng)藥的化學(xué)和信息。

實(shí)驗(yàn)部分試劑和化學(xué)品所有的試劑和溶劑均為 HPLC 或分析級(jí)。甲酸和乙腈來自Honeywell（Muskegon, MI, 美國），甲酸來自 Fluka（Sleinheim,德國）。農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品購自 Sigma-Aldrich（St Louis, MO, 美國），內(nèi)標(biāo)物質(zhì)磷酸三苯酯 (TPP) 來自安捷倫科技公司（Wilmington,DE, 美國）。標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液（除多菌靈為 0.5 mg/mL外，其余均為 2.0mg/mL）分別由甲醇、含 0.1% 甲酸的乙腈溶液和 DMSO 溶解制成，在 –20°C保存。三種濃度分別為 0.2、1 和 10 µg/mL 的QC 加標(biāo)溶液每天用 0.1% 甲酸水溶液-乙腈 (1:1) 新鮮配制。TPP濃度為 10 µg/mL 的內(nèi)標(biāo)加標(biāo)溶液用 0.1% 甲酸水溶液-乙腈(1:1)配制。

設(shè)備和材料安捷倫 1200 系列 HPLC（安捷倫科技公司, CA, 美國）帶電噴霧的安捷倫 6460 三重四極桿 LC/MS 系統(tǒng)（安捷倫科技公司, CA, 美國）Agilent Bond Elut AOAC 緩沖提取試劑盒 (p/n 5982-5755) 和適用于含有脂肪和蠟質(zhì)的水果和蔬菜的 Bond Elut QuEChERSAOAC 分散型 SPE 試劑盒 (p/n 5982-5158)（安捷倫科技公司,DE, 美國）安捷倫陶瓷勻漿器，50 mL 離心管 (p/n 5982-9313)（安捷倫科技公司, DE, 美國）Eppendorf 微量離心機(jī)（Brinkmann Instruments, Westbury, NY,美國）NY, USA)飛鴿牌離心機(jī)（安亭科學(xué)儀器廠，中國上海）

樣品制備樣品粉碎不含農(nóng)藥的有機(jī)生長大米購自當(dāng)?shù)厥袌?chǎng)。將該大米置于干凈塑料袋中，-20°C 冷凍過夜。時(shí)常揉捏塑料袋，以保證大米顆粒不結(jié)塊。第二天，取出所需用量的冷凍大米，混勻。邊粉碎邊加入干燥大米。樣品粉碎以保證其均勻性。在最終制成的樣品中無肉眼可見大米顆粒，證明粉碎完。提取/分配取 5 g (±0.1 g) 均勻樣品，置于 50mL 離心管中。用 100 µL 適宜濃度的 QC 標(biāo)準(zhǔn)溶液制成加標(biāo)的 QC 樣品。除空白樣品外，其余所有樣品中均加入 50 µL 內(nèi)標(biāo)溶液，制成內(nèi)標(biāo)濃度為 100 ng/g 的樣品溶液。蓋上離心管，渦旋混合 1 分鐘。用移液器往每管中加水10 mL，加蓋，渦旋混合 1 分鐘。每管中放入兩個(gè)適用于 50 mL離心管的陶瓷勻漿器 (p/n 5982-9313)。用移液器往每管中加入ACN (0.1% AA) 15 mL。蓋上離心管，用手振搖 1 分鐘。每管中直接加入安捷倫 Bond Elut QuEChERS AOAC 提取鹽 1 包，其中含無水硫酸鎂 6 g，醋酸鈉 1.5 g。將離心管密封，用手劇烈振搖20 秒，確保溶劑與樣品相互作用，同時(shí)塊狀結(jié)晶充分散開。樣品管以 4000 轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速離心 5 分鐘。分散型 SPE 凈化移取 8 mL 上層乙腈液，置于 15 mL 安捷倫 Bond Elut QuEChERSAOAC 分散型 SPE 試管 (p/n 5982-5158) 中。該 15 mL 試管中包含 PSA 400 mg，無水硫酸鎂 1200 mg，以及 C18 400 mg。將試管蓋緊，渦旋混合 15 分鐘，并以 4000 轉(zhuǎn)/分的標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)速離心 5分鐘。移取 1 mL 提取液，置于 10 mL 試管中，在 40°C 用氮?dú)獯蹈?。所得殘?jiān)靡译?水 (1:9) 溶解并定容至 1 mL，用 0.45 µm 濾膜 (p/n 5185-5836) 濾過，取濾液用 LC-MS/MS 進(jìn)行分析。

結(jié)果與討論根據(jù)推薦，本次研究選用了適合含脂肪與蠟質(zhì)樣品的 AOAC 分散型 SPE 試劑盒對(duì)大米進(jìn)行處理。由于 LC-MS/MS 的高選擇性，空白基質(zhì)樣品的 MRM 色譜圖顯示其對(duì)目標(biāo)化合物沒有干擾峰。圖 1 和圖 2 分別為加內(nèi)標(biāo)的空白基質(zhì)和用 AOAC 分散型 SPE 方法處理的 10 ng/g 加標(biāo)大米樣品提取物的 LC-MS/MS 色譜圖。

線性和定量限(LOD)所有待測(cè)農(nóng)藥的線性校正范圍為 5-500 ng/g。用空白基質(zhì)加標(biāo)的校正曲線其濃度水平分別為 5、10、50、250 和 500 ng/g，內(nèi)標(biāo)物質(zhì) TPP 的濃度為 50 ng/g。用待測(cè)組分的相對(duì)響應(yīng)值（待測(cè)組分峰面積/內(nèi)標(biāo)物峰面積）對(duì)待測(cè)組分的相對(duì)濃度（待測(cè)組分濃度/內(nèi)標(biāo)物濃度）作圖，得到校正曲線。所有農(nóng)藥的定量限為 5 ng/g，低于這些農(nóng)藥在水果和蔬菜中的最高殘留(MRL)。表 3 列出線性回歸方程和相關(guān)系數(shù) (R2)。

回收率和重現(xiàn)性通過在粉碎的樣品中加入農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品制成 10、50 和 250 ng/g的不同濃度水平的加標(biāo)樣品，對(duì)方法的回收率和重現(xiàn)性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。用標(biāo)準(zhǔn)加入曲線對(duì)這些 QC 樣品進(jìn)行定量分析。每個(gè)濃度水平重復(fù)測(cè)定 6 次?；厥章屎椭噩F(xiàn)性（用 RSD 表示）數(shù)據(jù)見表 4和圖 3?？梢钥闯觯?2 種農(nóng)藥組分均得到了很好的回收率和精密度。

結(jié)論安捷倫 Bond Elut QuEChERS AOAC 緩沖提取試劑盒和用于含脂肪和蠟質(zhì)的果蔬的分散型 SPE 試劑盒為大米中有代表性的農(nóng)殘測(cè)定提供了一種簡便、快速而有效的方法?；|(zhì)加標(biāo)樣品的回收率和重現(xiàn)性顯示，該方法可用于大米中多類別、多組分農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。大米中的雜質(zhì)和基質(zhì)效應(yīng)不干擾目標(biāo)化合物的定量分析。農(nóng)藥組分的定量限低于監(jiān)管要求的大米中最高殘留。由于本研究中所選擇的農(nóng)藥代表了廣泛的農(nóng)藥類別和性質(zhì)，對(duì)于類似食品基質(zhì)中其他農(nóng)藥殘留的檢測(cè)，安捷倫 Bond Elut QuEChERSAOAC 提取和分散型 SPE 試劑盒也是一種選擇。