上新 | 原代細(xì)胞抗生素--原代細(xì)胞防污染的“私人定制”

原代細(xì)胞（Primary cells）指采用酶、螯合劑或機(jī)械方法直接從活體組織或器官中分離出來(lái)的細(xì)胞。嚴(yán)格來(lái)說(shuō)，從機(jī)體分離出來(lái)到成功傳代之前的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞；但考慮到原代細(xì)胞可在體外分裂10~15次的特性，以及取材難度大、分離和培養(yǎng)成本高等因素，通常把第一代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞。

原代細(xì)胞離體時(shí)間短且未經(jīng)修飾，與體內(nèi)狀態(tài)相似度高，生物學(xué)特性未發(fā)生很大變化，仍保持了細(xì)胞在體內(nèi)的許多重要標(biāo)志和功能。因此，相比較于細(xì)胞系而言，通過(guò)原代細(xì)胞所獲取的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與體內(nèi)生理功能更接近、更能真實(shí)反映體內(nèi)環(huán)境。

在生物醫(yī)學(xué)研究中，原代細(xì)胞更適合用于藥物測(cè)試、細(xì)胞分化和轉(zhuǎn)化等實(shí)驗(yàn)，而且還可以有效避免涉及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方面的倫理爭(zhēng)議。在生物制藥方面，原代細(xì)胞也是理想的細(xì)胞模型，可用于疾病機(jī)制研究、藥物篩選、藥物代謝和毒理學(xué)研究等。

原代細(xì)胞的完整培養(yǎng)可分為6個(gè)步驟：取材、組織分離、細(xì)胞過(guò)濾和計(jì)數(shù)、接種和培養(yǎng)、傳代與維持、凍存和復(fù)蘇。

原代細(xì)胞對(duì)外界環(huán)境非常敏感，實(shí)驗(yàn)環(huán)境的細(xì)微變化都可能影響細(xì)胞的存活和功能。因此，需要嚴(yán)格控制上述實(shí)驗(yàn)的環(huán)境條件，保證在無(wú)菌環(huán)境中進(jìn)行操作，還要控制溫度、濕度和二氧化碳濃度等，從而確保細(xì)胞活力和最佳的培養(yǎng)效果。

在原代細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，很容易引發(fā)微生物污染，如：取材階段，由于是從人類(lèi)或動(dòng)物組織中分離的，因此易攜帶共生菌群和亞臨床感染等常見(jiàn)的微生物污染源。故在組織獲取、組織解離和細(xì)胞培養(yǎng)等環(huán)節(jié)，均普遍采用抗生素防污染。常用的抗生素包括青霉素、鏈霉素、慶大霉素、兩性霉素B、氨芐青霉素和卡那霉素等。但不建議長(zhǎng)期使用抗生素，因?yàn)槟承┰噭ㄈ鐑尚悦顾谺）從長(zhǎng)期來(lái)看可能對(duì)細(xì)胞有毒；并且不同抗生素會(huì)對(duì)細(xì)胞的代謝、增值、分化，甚至是基因表達(dá)都有不同程度的影響。

已知，抗生素的使用，雖然能預(yù)防原代細(xì)胞污染，但也引入了新的問(wèn)題。因此，既能確保原代細(xì)胞不受污染，又對(duì)細(xì)胞毒害性小的抗生素就成了迫切需求。不僅如此，細(xì)菌、真菌、支原體等的污染也是影響原代細(xì)胞生長(zhǎng)和發(fā)揮正常功能的因素，對(duì)細(xì)菌、真菌、支原體污染可有效預(yù)防，也是原代細(xì)胞對(duì)所需抗生素的硬性要求。

為此，翌圣生物自主研發(fā)了Antimicrobia Agent for Primary Cells原代細(xì)胞抗生素，其是用于原代細(xì)胞培養(yǎng)，無(wú)菌過(guò)濾，淡黃色溶液，儲(chǔ)存液濃度為50 mg/mL，推薦使用濃度為100-300μg/mL。

該原代細(xì)胞抗生素是一種廣譜抗生素制劑，旨在保護(hù)原代細(xì)胞免受微生物污染。原代細(xì)胞細(xì)胞模型很容易受到來(lái)自宿主動(dòng)物或細(xì)胞分離過(guò)程中的自然菌群污染。本產(chǎn)品能夠提供全面的微生物污染預(yù)防。它對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌（例如芽孢桿菌和葡萄球菌屬）和革蘭氏陰性菌（例如大腸桿菌，腸桿菌、銅綠假單胞菌和不動(dòng)桿菌）、支原體和真菌都有抑制作用。

通過(guò)抑菌實(shí)驗(yàn)，測(cè)定原代細(xì)胞抗生素體外抑制微生物生長(zhǎng)效力。其中，翌圣原代細(xì)胞抗生素和競(jìng)品A的使用濃度分別為33、50、100μg/mL。然后將稀釋好的不同濃度梯度的原代細(xì)胞抗生素溶液和提前配制好的細(xì)菌真菌懸液混合，接種于培養(yǎng)基中。在適宜的溫度和濕度條件下進(jìn)行培養(yǎng)。觀察并記錄細(xì)菌真菌的生長(zhǎng)情況，判斷原代細(xì)胞抗生素對(duì)細(xì)菌真菌的生長(zhǎng)抑制情況。根據(jù)下述結(jié)果，可以看出，翌圣生物的原代細(xì)胞抗生素較競(jìng)品A，有更好的抑菌效果。

圖1.原代細(xì)胞抗生素對(duì)細(xì)菌真菌的抑菌圈實(shí)驗(yàn)

翌圣生物的原代細(xì)胞抗生素處理細(xì)胞后，分別使用CCK-8和細(xì)胞計(jì)數(shù)的方式對(duì)細(xì)胞活力和增殖情況進(jìn)行檢測(cè)：從下圖可以看出加入原代細(xì)胞抗生素，對(duì)細(xì)胞活力和細(xì)胞增殖幾乎無(wú)影響。

圖2. 原代細(xì)胞抗生素加入前后細(xì)胞活力和細(xì)胞增殖情況圖