產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學(xué)|元素分析|水分測(cè)定儀|樣品前處理|試驗(yàn)機(jī)|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>其他文章>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢(xún)

ProteanFect:小鼠原代T細(xì)胞從提取到轉(zhuǎn)染全流程攻略

來(lái)源:上海華雅思創(chuàng)生物科技有限公司   2025年01月15日 14:23  
小鼠原代T細(xì)胞一般從脾臟組織中得到,包括脾臟研磨、細(xì)胞分離、純化T細(xì)胞等步驟。以下是常用的小鼠原代T細(xì)胞提取流程:

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

  1. 材料與試劑:新鮮小鼠脾臟、PBS緩沖液、無(wú)菌手術(shù)器械(剪刀、鑷子等)、細(xì)胞過(guò)濾器、CD4/CD8磁珠分選試劑(如需純化特定亞型),或陰選的方式去除B細(xì)胞、單核細(xì)胞、NK細(xì)胞的磁珠分選試劑,RPMI-1640培養(yǎng)基,人白介素2,胎牛血清,抗生素(如青霉素-鏈霉素)。
  2. 設(shè)備:無(wú)菌操作臺(tái)、離心機(jī)、磁力分選架。

從小鼠脾臟獲取單細(xì)胞懸液

  1. 小鼠頸椎脫臼處死,75%乙醇浸泡5分鐘,取出小鼠置于無(wú)菌操作臺(tái)上,左腹側(cè)朝上。
  2. 在小鼠左腹側(cè)中部剪開(kāi)小口,撕開(kāi)皮膚暴露腹壁,可見(jiàn)紅色長(zhǎng)條狀脾臟。
  3. 在脾臟下側(cè)提起腹膜,剪開(kāi)后上翻,暴露脾臟,用鑷子提起脾臟,眼科剪分離下面的結(jié)締組織,取出脾臟,剝?nèi)ブ車(chē)慕Y(jié)締組織,期間用含有2%FBS的PBS溶液保持脾臟濕潤(rùn)。
  4. 將脾臟放于70UM過(guò)濾網(wǎng)中,用注射器針芯輕輕研壓脾臟,用含2%FBS的PBS沖洗過(guò)濾網(wǎng),獲細(xì)胞懸液。
  5. 300G離心5分鐘,收集細(xì)胞沉淀,然后加入紅細(xì)胞裂解液裂解,將紅細(xì)胞充分裂解,收集白細(xì)胞。

從單細(xì)胞懸液中分離小鼠原代T細(xì)胞

  1. 全T細(xì)胞分離:利用陰選的方式去除B細(xì)胞、單核細(xì)胞、NK細(xì)胞等,按照分選試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。
  2. 亞群分離(如需要CD4+或CD8+ T細(xì)胞):
    • 使用CD4或CD8磁珠(如MACS磁珠)分選獲得特定T細(xì)胞亞群。
    • 將磁珠標(biāo)記的細(xì)胞懸液置于磁性分選裝置中,分離出目標(biāo)T細(xì)胞亞群。

培養(yǎng)與檢測(cè)

  1. 將分離的T細(xì)胞重懸于含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中,并加入抗生素與人白介素2。
  2. 細(xì)胞密度一般控制在1-2×10^6 CELLS/ML,放入37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

轉(zhuǎn)染

西湖凝聚體推出針對(duì)小鼠原代T的PT03 PROTEANFECT MAX小鼠原代T細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒。使用ProteanFect Max遞送EGFP mRNA至小鼠原代T細(xì)胞,實(shí)現(xiàn)高效表達(dá)。

企業(yè)介紹

華雅思創(chuàng)生物®專(zhuān)注于提供CGT、分子診斷和先進(jìn)醫(yī)療的生物試劑和醫(yī)療耗材產(chǎn)品,服務(wù)客戶遍及細(xì)胞治療、疫苗抗體、醫(yī)療診斷、腦科學(xué)、合成生物、長(zhǎng)壽研究和醫(yī)美保健等領(lǐng)域。"買(mǎi)試劑,找華雅”,華雅思創(chuàng)生物®憑借深厚的技術(shù)實(shí)力和嚴(yán)格的質(zhì)量控制體系,已成為眾多科研機(jī)構(gòu)和生物制藥企業(yè)的首·選供應(yīng)商。


免責(zé)聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類(lèi)作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)未開(kāi)通此功能
詳詢(xún)客服 : 0571-87858618