奧林巴斯進口顯微鏡 CX33 在組織切片觀察中應(yīng)用廣泛,以下是詳細的觀察步驟:
準備工作
顯微鏡檢查與調(diào)試:檢查顯微鏡各部件是否完好,確保電源正常連接。打開顯微鏡電源開關(guān),讓 LED 光源預(yù)熱片刻,使光線穩(wěn)定。根據(jù)個人習(xí)慣和觀察需求,調(diào)節(jié)顯微鏡的位置和高度,保持舒適的操作姿勢。
清潔鏡頭:使用專用的鏡頭紙輕輕擦拭物鏡和目鏡,去除表面灰塵和污漬,避免影響成像質(zhì)量。
準備切片:準備好已經(jīng)制作完成并染色的組織切片,常見的染色方法有蘇木精 - 伊紅(HE)染色。確保切片表面干凈,無污漬或雜質(zhì),若有需要,可使用干凈的擦鏡紙輕輕擦拭切片表面。
低倍鏡觀察
放置切片:將組織切片平穩(wěn)地放在顯微鏡的載物臺上,用壓片夾固定好,確保切片不會在觀察過程中移動。通過調(diào)節(jié)載物臺的 X、Y 軸移動旋鈕,使切片位于物鏡的正下方。
對焦:選擇低倍物鏡(通常為 4X 或 10X),轉(zhuǎn)動粗準焦螺旋,使載物臺緩慢上升,眼睛從側(cè)面觀察,直到物鏡接近切片,但不要接觸到切片,以防損壞鏡頭和切片。然后,從目鏡中觀察,同時反向轉(zhuǎn)動粗準焦螺旋,使載物臺緩慢下降,直到視野中出現(xiàn)模糊的圖像。接著,轉(zhuǎn)動細準焦螺旋,使圖像逐漸清晰。
初步觀察:利用載物臺的移動旋鈕,在低倍鏡下對整個組織切片進行全面觀察,了解切片的整體結(jié)構(gòu)和組織分布情況,確定感興趣或需要進一步詳細觀察的區(qū)域。比如,觀察組織的層次結(jié)構(gòu)、不同組織成分的大致分布以及是否存在明顯的病變區(qū)域等。
高倍鏡觀察
轉(zhuǎn)換物鏡:在低倍鏡下找到需要進一步觀察的區(qū)域后,將其移至視野中央。小心地轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器,切換到高倍物鏡(通常為 40X)。轉(zhuǎn)換過程中要緩慢、平穩(wěn),避免物鏡與切片發(fā)生碰撞。
微調(diào)對焦:由于高倍鏡的焦距較短,轉(zhuǎn)換到高倍鏡后,視野可能會變模糊,此時需輕輕轉(zhuǎn)動細準焦螺旋,使圖像清晰。注意在高倍鏡下只能使用細準焦螺旋進行對焦,切勿使用粗準焦螺旋,以免損壞切片和物鏡。
詳細觀察:在高倍鏡下,仔細觀察組織細胞的形態(tài)、大小、排列方式,細胞核的形態(tài)、大小、染色質(zhì)分布,以及細胞質(zhì)的染色情況等細節(jié)。例如,觀察細胞是否有異型性、核分裂象是否增多等,這些特征對于判斷組織的病理狀態(tài)非常重要。
油鏡觀察(若有需要)
滴加香柏油:當需要觀察更細微的結(jié)構(gòu)時,可使用油鏡(通常為 100X)。在轉(zhuǎn)換到油鏡之前,先在切片上需要觀察的區(qū)域滴一滴香柏油。香柏油的折射率與玻璃相近,能減少光線在空氣與玻璃界面的折射,提高分辨率。
轉(zhuǎn)換油鏡并對焦:小心地將油鏡轉(zhuǎn)換到工作位置,使油鏡浸入香柏油中。從目鏡中觀察,微調(diào)細準焦螺旋,使圖像清晰。使用油鏡時要格外小心,避免鏡頭與切片過度接觸。
觀察結(jié)束后清潔:觀察完畢后,用擦鏡紙沾取少量二甲苯,輕輕擦拭油鏡鏡頭,然后再用干凈的擦鏡紙擦干,以保護鏡頭。
觀察記錄
文字描述:在觀察過程中,及時用文字詳細記錄所觀察到的組織和細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)特征,以及是否存在異常情況等。例如,描述細胞的形狀是圓形、多邊形還是不規(guī)則形,細胞核的大小是否一致,染色是否均勻等。
繪圖記錄:可以通過繪圖的方式,直觀地記錄組織和細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。繪圖時要注意比例準確,標注清晰,突出重要的特征。
拍照留存:如果顯微鏡配備了圖像采集系統(tǒng),可對觀察到的典型圖像進行拍照留存,方便后續(xù)的分析和討論。拍攝時要注意調(diào)整圖像的亮度、對比度等參數(shù),確保圖像清晰、準確地反映觀察到的內(nèi)容。
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