奧林巴斯進(jìn)口顯微鏡CX43熒光轉(zhuǎn)染觀察方法

使用奧林巴斯進(jìn)口顯微鏡 CX43 進(jìn)行熒光轉(zhuǎn)染觀察，可按照以下步驟進(jìn)行操作，以清晰觀察到熒光轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞狀態(tài)及熒光表達(dá)情況：

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

確保已完成細(xì)胞的熒光轉(zhuǎn)染操作，并在合適的時(shí)間點(diǎn)將細(xì)胞準(zhǔn)備好用于觀察。轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞需在培養(yǎng)器皿（如培養(yǎng)皿、多孔板）中培養(yǎng)，使其達(dá)到適宜觀察的狀態(tài)。

準(zhǔn)備好顯微鏡配套的熒光濾光片組，根據(jù)所使用的熒光標(biāo)記物選擇合適的濾光片。常見的熒光標(biāo)記物有綠色熒光蛋白（GFP）、紅色熒光蛋白（RFP）等，不同的熒光蛋白需要使用對(duì)應(yīng)的激發(fā)光和發(fā)射光濾光片。

打開奧林巴斯顯微鏡 CX43 的電源，預(yù)熱光源，讓其穩(wěn)定發(fā)光，同時(shí)調(diào)節(jié)顯微鏡的亮度至適中水平。

放置樣本

將含有轉(zhuǎn)染細(xì)胞的培養(yǎng)器皿小心放置在顯微鏡的載物臺(tái)上，使用載物臺(tái)上的固定裝置（如玻片夾）將其固定好，避免在觀察過程中發(fā)生移動(dòng)。

通過載物臺(tái)的移動(dòng)旋鈕，將培養(yǎng)器皿中的細(xì)胞區(qū)域移動(dòng)到物鏡的正下方，使需要觀察的部位大致處于視野中心位置。

低倍鏡觀察定位

轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器，將低倍物鏡（如 4 倍或 10 倍）轉(zhuǎn)至工作位置，使其對(duì)準(zhǔn)通光孔。

從側(cè)面注視物鏡，同時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋，使載物臺(tái)緩慢上升，直到物鏡接近培養(yǎng)器皿（注意不要讓物鏡碰到培養(yǎng)器皿，一般距離約 0.5 - 1 厘米）。

從目鏡中觀察，緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋，使載物臺(tái)下降，直到看到模糊的細(xì)胞圖像。再轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，使細(xì)胞圖像清晰。

在低倍鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)區(qū)域，找到細(xì)胞分布較為均勻且熒光表達(dá)相對(duì)明顯的區(qū)域，將其移至視野中央，以便后續(xù)切換高倍鏡進(jìn)行詳細(xì)觀察。

熒光觀察模式切換

確定好觀察區(qū)域后，切換顯微鏡至熒光觀察模式。根據(jù)所使用的熒光標(biāo)記物，選擇對(duì)應(yīng)的熒光濾光片組。例如，觀察 GFP 標(biāo)記的細(xì)胞，需選擇能夠激發(fā)綠色熒光并過濾出相應(yīng)發(fā)射光的濾光片組。

打開熒光光源，調(diào)節(jié)熒光光源的強(qiáng)度，避免過強(qiáng)的熒光導(dǎo)致細(xì)胞圖像過曝或熒光淬滅，同時(shí)也要確保能夠清晰觀察到熒光信號(hào)。

高倍鏡觀察

轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器，換用高倍物鏡（如 20 倍或 40 倍）進(jìn)行更詳細(xì)的觀察。由于高倍物鏡的工作距離較短，此時(shí)不能再使用粗準(zhǔn)焦螺旋，只能通過轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋來微調(diào)焦距，使細(xì)胞和熒光圖像清晰。

在高倍鏡下仔細(xì)觀察細(xì)胞的形態(tài)、熒光的分布和強(qiáng)度。注意觀察熒光是在細(xì)胞的哪個(gè)部位表達(dá)，如細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核或細(xì)胞膜等，以及熒光的表達(dá)是否均勻。同時(shí)，觀察不同細(xì)胞之間熒光表達(dá)的差異。

圖像采集與記錄

使用顯微鏡配備的數(shù)碼攝像頭或連接電腦的圖像采集系統(tǒng)，拍攝觀察到的細(xì)胞熒光圖像?？梢耘臄z不同視野、不同曝光時(shí)間下的圖像，以獲取最佳的觀察效果。

在拍攝圖像時(shí)，記錄下圖像的放大倍數(shù)、熒光濾光片組的選擇、曝光時(shí)間等參數(shù)，以便后續(xù)對(duì)圖像進(jìn)行分析和對(duì)比。

對(duì)拍攝的圖像進(jìn)行標(biāo)注，注明樣本的來源、轉(zhuǎn)染的時(shí)間、觀察的時(shí)間等信息，方便實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的整理和分析。

觀察結(jié)束與設(shè)備維護(hù)

觀察結(jié)束后，關(guān)閉熒光光源和顯微鏡的電源。將培養(yǎng)器皿從載物臺(tái)上取下，按照實(shí)驗(yàn)室的廢棄物處理規(guī)定進(jìn)行處置。

清潔顯微鏡的載物臺(tái)、物鏡、目鏡等部件，去除可能殘留的細(xì)胞培養(yǎng)基或其他污染物。將顯微鏡恢復(fù)到初始狀態(tài)，妥善保管，定期進(jìn)行維護(hù)和校準(zhǔn)，以確保其性能的穩(wěn)定性和觀察的準(zhǔn)確性。