ELISA試劑盒實驗過程中,操作過程中有一些易被人們忽視小細節(jié),但這些小細節(jié)卻對試驗結(jié)果會產(chǎn)生直接影響。以下是ELISA試劑盒控制操作過程的九點要素:
一、嚴格按照試劑說明書進行操作。操作前將試劑在室溫下平衡30~60min。
二、加樣后及時放人孵箱。標本較多時,要分批操作。按說明步驟嚴格控制操作時間,防止孵育時間人為延長,導致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗。
三、封板溫育時,各孔一定要封嚴,防止陽性標本的液體蒸發(fā),產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導致“花板”的出現(xiàn)。
四、用洗板機洗板時,保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干:還要防止針口有纖維蛋白或異物,這些異物在洗板的過程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導致“花板”的出現(xiàn)。
五、合理安排檢測量,以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。
六、加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
七、顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用。
八、加樣時保持顯色劑不外流;A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
九、應(yīng)保證酶標板清潔,整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸。以上的措施可以使“花板”降至限度。從而提高檢測的特異性。并得到更準確、可靠的實驗結(jié)果。
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