動植物組織RNA穩(wěn)定液是一種用于穩(wěn)定并保護(hù)采集樣本內(nèi)RNA的無毒溶液,可迅速滲入組織,滅活內(nèi)源RNase,從而避免RNA降解,保持樣本中RNA的完整性。
動植物組織RNA穩(wěn)定液可以保存哪些樣本?
該產(chǎn)品適用于多種脊椎動物樣本,包括腦、心、腎、脾、肝、睪丸、骨骼肌、脂肪、肺和胸腺,對大腸桿菌、果蠅、組織培養(yǎng)細(xì)胞、全血細(xì)胞和一些植物也有效。
動植物組織RNA穩(wěn)定液在不同溫度下的保存時間?
保存條件:
37°C 下可穩(wěn)定1天
25°C 下可穩(wěn)定1周
4°C 下可穩(wěn)定1個月
-20°C或-80℃ 長期保存
動植物組織RNA穩(wěn)定液的使用方法
A. 動物組織:RNAsafe穩(wěn)定液不會破壞動物組織結(jié)構(gòu)的完整性。
處理過程:將組織切成合適大小后(≤0.5 cm),然后加入5倍體積RNAsafe。
注:已浸入RNAsafe的組織經(jīng)平衡一段時間后,可從溶液中取出,切成更小的組織塊(≤0.5 cm大?。?,再重新放回RNAsafe。
某些組織(如骨頭)具有比較弱的液體滲透性,不適合用本品進(jìn)行RNA保護(hù)。
B. 植物組織:本品對于柔軟的植物組織(如嫩葉,嫩莖)可直接滲透,且達(dá)到理想的RNA保護(hù)效果。
處理過程:將組織切成合適的大?。ā?.5 cm)后,加入5倍體積的RNAsafe穩(wěn)定液。
注:某些植物組織天生具有的屏障(如葉子表面的蠟層)可阻礙RNAsafe滲透,對于此類組織,往往需要破壞這些屏障層以允許溶液的浸透。
C. 組培細(xì)胞、白細(xì)胞等:按照標(biāo)準(zhǔn)實驗操作收集細(xì)胞沉淀(用PBS清洗1-2次)。之后加入5~10倍體積的RNAsafe。
D. 酵母:離心棄上清,收集約108個細(xì)胞(12,000g,2 min)。加入0.5~1 mLRNAsafe。
長期保存:應(yīng)置于RNAsafe中,4℃放置1小時。然后離心棄上清,收集酵母細(xì)胞(12,000g,5 min),-80℃保存。
使用動植物組織RNA穩(wěn)定液的注意事項
A. -80℃保存:樣品結(jié)凍保存。對于歸檔的樣本,建議-80℃保存。該保存條件下,樣本可長期保存,保護(hù)效果佳。
操作過程:樣本4℃浸透過夜,然后再轉(zhuǎn)移至-80℃。
如果中間需要做樣本的融化,建議取出4℃浸透過夜的組織或離心收集細(xì)胞,然后再凍存于-80℃。RNAsafe保護(hù)后的樣本抽提RNA時,可直接放在室溫融化,之后重新凍上,不會造成RNA量的嚴(yán)重?fù)p失或者RNA完整性的明顯破壞。
B. -20℃保存:同樣適用于歸檔樣本的保存。樣本不會在-20℃結(jié)凍,但可能會形成結(jié)晶。該保存條件下,樣本可長期保存,不會對后續(xù)RNA分離造成影響。
操作過程:樣本4℃浸透過夜,然后再轉(zhuǎn)移至-20℃。RNAsafe保護(hù)后的樣本抽提RNA時,可直接放在室溫融化,之后重新凍上,不會造成RNA量的嚴(yán)重?fù)p失或者RNA完整性的明顯破壞。
C. 4℃保存:大部分樣品放到RNAsafe中,可穩(wěn)定保護(hù)1個月,不會有明顯的RNA降解發(fā)生。
D. 25℃(室溫)保存:建議低溫環(huán)境保存。若條件不允許,請將RNAsafe穩(wěn)定液于冰上冷卻幾個小時,然后將樣品浸入此溶液中,室溫穩(wěn)定保存1周,不會有明顯的RNA降解發(fā)生。
E. 37℃保存:純化的RNA樣本于37℃孵育24 h,結(jié)構(gòu)依然完整。
使用動植物組織RNA穩(wěn)定液保存的樣本如何做RNA提取?
因RNAsafe滅活RNase的過程是可逆的,受保護(hù)的樣本使用前務(wù)必不要清洗掉RNAsafe。
A. 組織樣本:用滅菌鑷子從RNAsafe中取出組織塊,然后用干凈的吸水紙吸掉表面液體。之后立即置于裂解液中勻漿。
B:細(xì)胞樣本:由于RNAsafe密度較大,此時需要使用大于普通介質(zhì)的離心力。一般來說,保存在RNAsafe中的細(xì)胞能承受更高的轉(zhuǎn)速,并維持細(xì)胞的完整性。大部分細(xì)胞可通過5,000g,5 min離心收集沉淀。
注意:由于不同細(xì)胞承受離心力會有差異,建議先用少量的細(xì)胞進(jìn)行離心速度承受性的測試。
C. 抽提RNA:按照RNA抽提Protocol進(jìn)行即可。
測試數(shù)據(jù)展示
實驗結(jié)論:37℃ 1天、25℃ 7天、4℃ 30天、-80℃ 30天保存的細(xì)胞采用翌圣組織細(xì)胞RNA提取試劑盒(Cat#19221)提取RNA,RNA濃度高,純度好,條帶完整清晰,28S:18S>2:1,完整性非常好,且沒有DNA殘留。
產(chǎn)品推薦
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號 |
RNAsafe Tissue Stabilizer RNAsafe動植物組織RNA穩(wěn)定液 | 10604ES |
RNAsafe-ICE冰凍動植物組織RNA穩(wěn)定-過渡溶液 | 10605ES |
MolPure® Cell/Tissue Total RNA Kit 細(xì)胞/組織總RNA提取試劑盒 | 19221ES |
TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent TRIeasy™總RNA提取試劑 | 10606ES |
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