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尺寸排阻色譜柱是一種廣泛應(yīng)用于生物分析領(lǐng)域的工具，其工作原理主要基于分子大小差異進行分離。利用柱內(nèi)固定相中孔隙與分子間的物理作用來實現(xiàn)分離。具體來說，聚合物分子在柱子中的孔道中被篩選，較大的分子無法通過尺寸較小的孔道，只有較小的分子才能通過這些孔道，從而實現(xiàn)不同分子尺寸的分離。其優(yōu)點在于其分離速度快、操作簡單、分離效果好。此外，該技術(shù)不依賴于分子之間的親和性或化學(xué)性質(zhì)，因此適用于各種生物大分子，如蛋白質(zhì)、多肽和核酸等的分離。
尺寸排阻色譜柱在使用過程中可能會遇到以下一些常見問題：
1、柱效與峰形問題
柱效下降：可能是由于樣品與流動相未過濾，雜質(zhì)堵塞柱子導(dǎo)致。若出現(xiàn)此現(xiàn)象，需用合適的溶劑沖洗柱子，如參考說明書、操作手冊等文件進行沖洗操作。另外，若使用的流動相含有有機溶劑，也可能導(dǎo)致柱效下降。
峰形異常：包括峰型變寬、分岔、分離度下降等。這可能是進樣量超過柱體積的5%，或樣品濃度過高、粘度大，使樣品無法以同一速度通過色譜柱，產(chǎn)生“指形效應(yīng)”。此時應(yīng)控制進樣量和樣品濃度，保證樣品粘度與流動相一致。
出現(xiàn)鬼峰：若不是溶劑與流動相差異導(dǎo)致的基線波動，需通過排除法，如進空白溶劑、換柱子等，找到雜峰、鬼峰的來源并解決。
毛刺峰：通常是柱身中進了空氣所致，可通過長時間低流速的流動相沖洗去除氣泡。
2、保留時間漂移問題
流動相因素：若流速穩(wěn)定，可能是流動相未完q混勻，導(dǎo)致洗脫強度不斷變化從而使保留時間漂移。需確保流動相充分混合均勻后再進行分析。
系統(tǒng)故障：若流速和壓力不穩(wěn)定，可能是儀器泵液系統(tǒng)產(chǎn)生漏液、故障等問題，需要實際排查修復(fù)。
3、色譜柱堵塞與柱壓問題
柱頭篩板堵塞：如果柱頭篩板處堵塞導(dǎo)致柱壓接近柱壓上限，可以通過反向沖洗色譜柱來解決，但要注意將流出液體直接排至廢液桶防止二次污染。常規(guī)的由雜質(zhì)吸附填料引起的壓力升高，可通過正向沖洗掉雜質(zhì)來解決。
壓力超限：可能超過了色譜柱的最大耐壓，導(dǎo)致填料被壓實或損壞，影響分離效果和柱壽命。應(yīng)立即降低壓力，檢查并更換受損部件。
4、使用壽命問題
雜質(zhì)影響：樣品和流動相中的雜質(zhì)會堵塞柱子，縮短其壽命。因此樣品與流動相進樣前必須過濾，流動相建議現(xiàn)配現(xiàn)用。
使用不當：如在不適當?shù)膒H值、緩沖液種類或鹽濃度下操作，以及在極d溫度或壓力條件下使用等，都可能損害色譜柱。應(yīng)嚴格按照操作規(guī)程使用和維護色譜柱。
5、溶劑相關(guān)問題
溶劑不匹配：樣品溶劑與流動相的不一致可能會導(dǎo)致不同程度的干擾，嚴重時會影響分離效果。一般要求溶劑與流動相完q一致，或通過稀釋盡量保持接近。
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