A549細(xì)胞培養(yǎng)說(shuō)明

A549細(xì)胞培養(yǎng)說(shuō)明

一、細(xì)胞基本信息

來(lái)源：人非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織。

類(lèi)型：貼壁生長(zhǎng)，上皮樣細(xì)胞。

應(yīng)用：常用于癌癥、藥物篩選、毒理學(xué)及基因表達(dá)研究。

二. 培養(yǎng)基及試劑

基礎(chǔ)培養(yǎng)基：DMEM（高糖）或 RPMI-1640。

添加成分：

   10% 胎牛血清（FBS）。

   1% 青霉素-鏈霉素雙抗（可選）。

消化試劑 ：0.25% 胰酶-EDTA。

三、培養(yǎng)步驟

1、復(fù)蘇細(xì)胞：

   - 快速解凍（37℃水?。?，離心后重懸于培養(yǎng)基，接種于培養(yǎng)瓶。

2、培養(yǎng)條件：

   - 37℃、5% CO? 培養(yǎng)箱。

   - 每2-3天換液，觀(guān)察細(xì)胞密度達(dá)80%-90%時(shí)傳代。

3、傳代操作：

   - 棄舊液，PBS清洗。

   - 加入胰酶消化1-2分鐘，顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞脫落。

   - 加入含血清培養(yǎng)基終止消化，離心后按1:3至1:5比例分瓶。

四、注意事項(xiàng)

污染防控：嚴(yán)格無(wú)菌操作，定期檢測(cè)支原體。

細(xì)胞狀態(tài)：貼壁不良或空泡增多時(shí)需排查培養(yǎng)基或污染。

凍存：使用凍存液（含10% DMSO），逐步降溫后存于液氮。

常見(jiàn)問(wèn)題：

一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成，

首先，要肉眼觀(guān)察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀(guān)察培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)，黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染，微生物則會(huì)大量繁殖，培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混油。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。如果在鏡下現(xiàn)察細(xì)胞，生長(zhǎng)狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比，沒(méi)有任何變化，那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān):

(1)細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)老，破碎的細(xì)胞殘骸:

(2)配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不直細(xì)胞生長(zhǎng);

(3)培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn)，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除;

(4)血清等級(jí)不足以維持細(xì)胞良好的生長(zhǎng)，更換高等級(jí)的胎牛血清。