鱟試驗(yàn)法在藥物內(nèi)毒素含量檢測中的應(yīng)用探究

在藥物質(zhì)量控制中，內(nèi)毒素含量的檢測至關(guān)重要。鱟試驗(yàn)法（LT法）在檢測藥物內(nèi)毒素方面有著獨(dú)-特的地位。

美國FDA已將LT法確定為法定的藥物內(nèi)毒素檢測方法。當(dāng)應(yīng)用鱟試劑進(jìn)行檢測時(shí)，其敏感性不得低于0.2EU/mL，并且要充分考慮藥物中內(nèi)毒素的耐受限-量（Tolerance limit），這個(gè)限-量等于每mg或每ml產(chǎn)物中內(nèi)毒素的允許量。

對(duì)于藥物的內(nèi)毒素檢測，如果一種藥品未通過LT法檢測，即便通過了RT法（家兔熱原試驗(yàn)，Rabbit pyrogen test），除RT法由官-方進(jìn)行的情況外，這種藥物也不能出廠。

某些藥物，特別是那些已知有抑制或增強(qiáng)LT反應(yīng)的藥物，必須進(jìn)行抑制/增強(qiáng)試驗(yàn)。

一、抗生素內(nèi)毒素含量的LT法檢測

1、多數(shù)抗生素適用LT法

應(yīng)用LT法檢測抗生素中內(nèi)毒素的含量是非常適宜的。大多數(shù)常用的抗生素，如林可霉素、氯霉素、慶大霉素、雙氫鏈霉素、乳酸鹽紅霉素等并不抑制LT反應(yīng)，所以可以直接采用LT法進(jìn)行測定。

2、部分抗生素需特殊處理

然而，有一些抗生素溶液能抑制LT反應(yīng)，在這種情況下必須進(jìn)行抑制試驗(yàn)。具體做法是用足量的無熱原水進(jìn)行稀釋，直至達(dá)到該抗生素不能抑制LT凝膠作用的最高濃度后再進(jìn)行試驗(yàn)。由于這些抗生素可能抑制LT反應(yīng)，所以采用的鱟試劑的敏感度必須等于或超過藥典規(guī)定的熱原試驗(yàn)的敏感度。

在能抑制LT反應(yīng)的藥物中，青霉素類藥物較為典型。其抑制機(jī)理目前尚不明確，一種觀點(diǎn)認(rèn)為青霉素對(duì)細(xì)菌細(xì)胞壁所含的酶起作用；另一種觀點(diǎn)認(rèn)為青霉素對(duì)LT凝膠形成的抑制作用與它們的血清蛋白結(jié)合率有顯著相關(guān)（p < 0.01）。例如BRL1071青霉素，其血清蛋白結(jié)合率最高，對(duì)LT反應(yīng)的抑制作用也最-強(qiáng)，僅需1.5mmol就能起抑制作用。鹽酸四環(huán)素對(duì)LT反應(yīng)也有抑制作用，原因是抗生素溶液pH過低（約4）。

值得注意的是，用LT法測定抗生素中內(nèi)毒素含量比RT法敏感10 - 100倍。

二、抗腫瘤藥物內(nèi)毒素含量的LT法檢測

1、內(nèi)毒素污染的風(fēng)險(xiǎn)

腫瘤化學(xué)療劑的副反應(yīng)較多，有些與應(yīng)用內(nèi)毒素后的反應(yīng)相似，所以其不良反應(yīng)可能是由于內(nèi)毒素污染造成的。例如，左旋門冬酰胺酶由大腸桿菌或歐氏（Erwinia）植病桿菌制備，由大腸桿菌制備的門冬酰胺酶每1000單位含內(nèi)毒素超過1ng，由歐氏桿菌制備的酶中也發(fā)現(xiàn)有微量內(nèi)毒素；博萊霉素、柔紅霉素、長春新堿等藥品也存在少量內(nèi)毒素，一般為0.1 - 5ng/ml。

2、 LT法的適用性

因?yàn)橛行┛鼓[瘤藥有細(xì)胞毒性，不宜采用RT法，所以LT法用于抗腫瘤藥物中內(nèi)毒素的檢測是可行且適宜的。在實(shí)際操作中，試管法仍然是最-實(shí)-用的方法。

綜上所述，鱟試驗(yàn)法（LT法）在藥物內(nèi)毒素檢測中有著不可替代的作用，無論是常見抗生素還是抗腫瘤藥物，都需要依據(jù)其特性準(zhǔn)確運(yùn)用LT法來確保藥物內(nèi)毒素含量在安全范圍內(nèi)。