培養(yǎng)基原材料的生物學(xué)檢驗方法及檢驗指標(biāo)！

百歐博偉生物：生物學(xué)指標(biāo)檢驗是營養(yǎng)類原材料最主要和最關(guān)鍵的指標(biāo),直接關(guān)系培養(yǎng)基的質(zhì)量好壞。原材料生產(chǎn)廠家和培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家都應(yīng)重點進行檢測。主要檢測的指標(biāo)有可發(fā)酵糖試驗、H2S試驗、靛基質(zhì)(吲哚)試驗、V-Р試驗、生長試驗、色素試驗、菌落總數(shù)檢測和耐熱芽孢桿菌總數(shù)等。

1、可發(fā)酵糖試驗

稱取樣品2.0g、氯化鈉0.5g、酚紅0.002g、蒸餾水或去離子水100mL,配制成溶液，調(diào)節(jié)其pH值至7.2～7.4,分裝于含有小倒管的試管中,每管6.0mL,115℃高壓滅菌15min后，接種大腸埃希氏菌和鼠傷寒沙門氏菌18h~24h的新鮮培養(yǎng)物，35℃±2℃培養(yǎng)18h～24h,觀察結(jié)果。陰性結(jié)果：培養(yǎng)基顏色為橙紅色或紅色,不產(chǎn)氣。陽性結(jié)果：培養(yǎng)基顏色變成黃色,產(chǎn)氣或不產(chǎn)氣。

2、H2S試驗

稱取樣品1.0g、氯化鈉0.5g、蒸餾水或去離子水100mL，配制成溶液，調(diào)節(jié)其pH值至7.2～7.6,分裝于試管中,每管6.0mL,121℃高壓滅菌15min后,接種鼠傷寒沙門氏菌的18h～24h的新鮮培養(yǎng)物,將醋酸鉛(PbAc)試紙插人試管中,試紙下端距離液面2cm～3cm,蓋好試管蓋30℃～35℃培養(yǎng)24h~48h,觀察結(jié)果。陽性結(jié)果:醋酸鉛試紙條變黑，且黑色域不得小于0.5cm。陰性結(jié)果:醋酸鉛試紙條不變黑或黑色域小于0.5cm。

3、靛基質(zhì)(吲哚)試驗

稱取樣品2.0g、氯化鈉0.5g,蒸餾水或去離子水100mL,配制成溶液，調(diào)節(jié)其pH值至7.2～7.6,分裝于試管中,每管6.0mL,121℃高壓滅菌15min高壓滅菌后,分別接種大腸埃希氏菌、鼠傷寒沙門氏菌的18h～24h 的新鮮培養(yǎng)物,35℃±2℃培養(yǎng)18h～24h。觀察結(jié)果時每管加入2～4滴靛基質(zhì)試劑。10s內(nèi)液面上出現(xiàn)玫瑰紅色環(huán)者為陽性,出現(xiàn)黃色者為陰性。大腸埃希氏菌應(yīng)為陽性,鼠傷寒沙門氏菌呈陰性。

4、V-P試驗

稱取樣品0.7g、葡萄糖0.5g、氯化鈉0.5g,加100mL的蒸餾水或去離子水配制成溶液,調(diào)節(jié)其pH值7.2～7.4,以每管6.0mL分裝115℃高壓滅菌15min后,分別接種產(chǎn)氣腸桿菌,大腸埃希氏菌的18h~24h新鮮培養(yǎng)物,35℃±2℃培養(yǎng)18h～24h。觀察結(jié)果時，除去試管帽,依次加入VP試劑甲、乙液，甲液6滴,乙液2滴,混合均勻,放置36℃培養(yǎng)箱孵育30min,溶液變紅色為陽性,不變色為陰性。產(chǎn)氣腸桿菌呈陽性反應(yīng),大腸埃希氏菌呈陰性反應(yīng)。

5、色素試驗

稱取樣品2.0g、氯化鈉0.5、瓊脂1.2g,加入100mL的蒸餾水或去離子水中,加熱溶解,調(diào)節(jié)pH值7.2～7.4,121℃高壓滅菌15min高壓滅菌后,待溫度降到50℃左右時傾注平板﹐充分凝固后﹐四區(qū)劃線接種金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞桿菌的新鮮培養(yǎng)物,35℃±2℃培養(yǎng)18h~24h,觀察結(jié)果,應(yīng)生長良好,金黃色葡萄球菌有黃色色素生成﹐銅綠假單胞菌有綠色色素生成。

6、生長試驗

(1)質(zhì)控菌株

大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、鼠傷寒沙門氏菌、銅綠假單胞菌、福氏志賀氏菌、乙型溶血性鏈球菌。

(2)液體培養(yǎng)基生長試驗(九管法）

1)培養(yǎng)基配制:2.0g樣品、0.5g氯化鈉,加入到100ml的蒸餾水或去離子水中,加熱溶解，調(diào)節(jié) pH值至7.2～7.4,分裝試管，每管9ml，121℃高壓滅菌15min后,冷卻備用。

2)操作方法:將質(zhì)控菌株18h～24h新鮮培養(yǎng)物用無菌水制成108標(biāo)準菌懸液(與標(biāo)準比濁管比較),10倍梯度稀釋至10-7,依次接種10-5,10-6,10-7菌懸液于液體培養(yǎng)基管中,每個濃度重復(fù)3管,35℃±2℃培養(yǎng)18h～24h。同時用合格品做對照品,樣品應(yīng)與對照品結(jié)果基本一樣或優(yōu)于對照品時，判為合格。

(3)固體培養(yǎng)基生長試驗(平皿定量滴加法）

1)培養(yǎng)基配制:2.0g樣品、0.5g氯化鈉、1.2g瓊脂，加入到100ml的蒸餾水或去離子水中,加熱溶解,調(diào)節(jié) pH值7.2～7.4,121℃高壓滅菌15min后,倒平板,待充分凝固后并倒置于37℃培養(yǎng)箱1h~2h后，備用。

2)操作方法:制備好的固體培養(yǎng)基，用記號筆成90°交叉劃線分成四份，依次滴加10mL，濃度為104CFU/mL、105CFU/ml、106CFU/ml、107CFU/ml的質(zhì)控菌株菌液，輕輕搖動，待菌液吸干后倒置于35℃±2℃培養(yǎng)18h～24h。同時用合格品做對照品，樣品應(yīng)與對照品結(jié)果基本一樣或優(yōu)于對照品時，判為合格。

(4)生長試驗結(jié)果評判

1)九管法和平皿定量滴加法都合格時，此原材料適合絕大部分培養(yǎng)基使用。

2)九管法合格，而平皿定量滴加法不合格時，此原材料適合于大部分液體培養(yǎng)基使用。

3)九管法不合格，而平皿定量滴加法合格時，此原材料適合于大部分含瓊脂培養(yǎng)基使用。

4)兩種都不合格時，此原材料為不合格，不要用于配制培養(yǎng)基。

7、菌落總是檢測

稱取25g樣品溶解于225mL無菌蒸餾水或去離子水后，制成10倍系列稀釋液，選取兩三個適宜稀釋度，吸取1mL樣品液涂布于平板計數(shù)瓊脂(PCA)平板上,36℃±1℃培養(yǎng)48h±2h計數(shù)結(jié)果,需做2個重復(fù)。

8、耐熱芽孢桿菌檢測

稱取25g樣品溶解于225mL無菌蒸餾水或去離子水后,制成10倍系列稀釋液，選取兩三個適宜稀釋度，吸取lmL樣品液涂布于葡萄糖胰蛋白豚瓊脂平板上,55℃±1℃培養(yǎng)48h±2h計數(shù)結(jié)果﹐需做⒉個重復(fù)。

主要營養(yǎng)類原材料的生物學(xué)檢驗指標(biāo)見表4-5-2。

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