Bradford蛋白定量試劑盒說明書

產品簡介：

Bradford Protein Assay Kit 檢測原理是在酸性乙醇溶液中考馬斯亮藍G250與蛋白結合顏色由棕色變?yōu)樗{色，在595nm有最大吸收值，檢測速度很快，少量樣品一般只需10min 即可完成檢測，檢測濃度下限達到25μg/ml，最小檢測蛋白量達到0.5μg，待測樣品體積為1～20μl，在50~1000μg/ml濃度范圍內有較好的線性關系。該試劑盒僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：

1、酶標儀或分光光度計、96 孔板或比色杯、電子天平、研缽或勻漿器、離心機、離心管

2、蒸餾水、0.9%NaCl 或PBS

操作步驟(僅供參考)：

1、樣品蛋白質的提?。悍Q取新鮮綠豆芽下胚軸(或小麥葉片)0.5~1.0g放入研缽中，加2mL蒸餾水研磨成勻漿，轉移到離心管中，再用6mL蒸餾水分次洗滌研缽，洗滌液收集于同離心管中，在室溫(20~25℃)下放置0.5~1h以充分提取，然后4000r/min 離心20min去沉淀，上清液轉入10mL容量瓶，以蒸餾水定容至刻度，即得待測樣品提取液。

2、取1ml蛋白標準配制液加入到含有 20mg的蛋白標準(BSA)中，充分溶解，后配制成20mg/ml的蛋白標準溶液，配制后可立即使用，配制的蛋白標準溶液應-20℃保存。

3、取適量的20mg/ml蛋白標準，用蛋白標準稀釋液稀釋至終濃度為500μg/ml 或所需濃度，如取25μl 20mg/ml 蛋白標準，加入975μl蛋白標準稀釋液，充分混勻，即配制成500μg/ml 蛋白標準溶液。特別提示：待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中，例如待測蛋白溶解于蔗糖中，亦取20mg/ml 蛋白標準溶解于蔗糖中；一般也可以用 0.9%NaCl或PBS作為溶解BSA稀釋液，稀釋后的500μg/ml蛋白標準溶液也應-20℃長期保存。
4、將標準品按 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl 加到 96 孔板或EP管中，加蛋白標準稀釋液補足至20μl。
5、加適當體積樣品到96孔板或EP管中，補蛋白標準稀釋液至20μl。
6、各孔加入200μl G250染色液，室溫放置3～5min。
7、酶標儀或分光光度計測定595nm 波長處的吸光度，560~610nm之間的波長也可，根據標準曲線計算出樣品中的蛋白濃度。
注意事項：
1、 G250染色液恢復至室溫充分混勻后使用，有利于提高檢測的靈敏度，加完G250染色液后，盡量在30min 內完成吸光度的測定，防止沉淀形成后影響實驗結果。
2、 蛋白標準在全部溶解后先混勻，再稀釋成一系列不同濃度的蛋白標準。
3、 待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標準也應溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測蛋白與蛋白標準中所含非蛋白成分不一致，有可能導致測定不準確。
4、 建議每次測定時都做標準曲線，因為測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應的速度和溫度有關，所以除非精確控制顯色反應的時間和溫度，否則如需精確測定 應每次都做標準曲線。
5、 沒有酶標儀，也可使用分光光度計測定，但應考慮比色杯的最小檢測體積，需按比例適當加大G250染色液、樣品和標準品的用量使總體積不小于最小檢測體積，使用分光光度計測定蛋白濃度時，每個試劑盒可以測定的樣品數量可能會顯著減少。
6、 用比色杯測定蛋白含量時，由于考馬斯亮藍易結合石英比色杯，應優(yōu)先選用一次性塑料比色杯，如用玻璃比色杯，比色完畢應立即用乙醇清洗干凈。
7、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
8、 試劑開封后請盡快使用，以防影響后續(xù)實驗效果。

有效期：12個月有效，蛋白標準配制成溶液后應-20℃凍存。