Calcein Red, AM 鈣黃綠素紅，具體染色步驟

試劑簡介

Calcein Red, AM 鈣黃綠素紅（紅色）是用于標記和檢測活細胞細胞功能的熒光探針之一。Calcein Red, AM自身無熒光，具有細胞膜滲透性。

一旦進入細胞后，被細胞內(nèi)酯酶水解為鈣黃綠素紅（Calcein Red），能與胞內(nèi)鈣離子結(jié)合，產(chǎn)生強烈的紅色熒光（Ex/Em=560/574），用標準的TRITC/Cy3濾片設(shè)置檢測。

Calcein Red AM對濕度敏感，粉末保存要保持干燥。Calcein Red AM儲存液需要分裝避光凍存，且須緊緊密封蓋子，干燥保存。Calcein Red AM工作液須現(xiàn)配現(xiàn)用。

試劑信息

同義名：Calcein Red Acetoxymethyl ester鈣黃綠素紅乙酰甲酯；

分子量：1015.79

純度：≥95%（HPLC）

Ex/Em：560/574nm

溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

儲存條件：-20℃避光干燥

Calcein Red, AM 鈣黃綠素紅染色步驟

大多數(shù)實驗中Calcein Red AM的工作濃度為2-5μM。

由于不同細胞系的染色條件不同，初次實驗建議做梯度實驗，以確定Calcein Red AM的工作濃度，使用低探針濃度得到的熒光結(jié)果為篩選原則。

（1）取一管適量分裝的儲存液（1000×）置于室溫，至少回溫20min，低速離心后，用合適的緩沖液如PBS，HBSS-HEPES稀釋到1×染色工作液。

（2）對于貼壁細胞，先用胰酶-EDTA消化細胞，離心收集細胞（1000 rpm，3min）。對于懸浮細胞，直接離心收集細胞。

（3）去上清，用緩沖液清洗細胞2~3次，充分去除殘留的酯酶活性。

（4）用1/10細胞培養(yǎng)基體積的Calcein Red AM染色工作液重懸細胞，37℃孵育20min～1h。

（5）用PBS（或者其他緩沖液）洗滌細胞兩次去除多余染料。

（6）用含合適濾光片（Ex/Em= 560nm/574nm）的儀器進行檢測。

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