體內(nèi)哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗儀 操作規(guī)程

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一、儀器介紹

實驗?zāi)康模?/span>

檢測受試物是否引起哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變,以評價受試物致突變的可能性

實驗概述：

染色體是細(xì)胞核中具有特殊結(jié)構(gòu)和遺傳功能的小體,當(dāng)化學(xué)物質(zhì)作用于細(xì)胞周期G1期和S期時誘發(fā)染色體型畸變,而作用于G2期時則誘發(fā)染色單體型畸變。給試驗的大、小鼠腹腔注入秋水仙素抑制細(xì)胞分裂時紡錘絲的形成,以增加中期分裂相細(xì)胞的比例,并使染色體絲縮短、分散、輪廓清晰。在顯微鏡下觀察染色體數(shù)目和形態(tài)。本方法特別適用于需考慮體內(nèi)代謝活化后的染色體畸變分析。若有證據(jù)表明受試物或其代謝產(chǎn)物不能到達(dá)骨髓,則不適用于本方法，

應(yīng)用范圍

應(yīng)用于科研、農(nóng)業(yè)、衛(wèi)生、教育、霧霾狀態(tài)可吸入顆粒染毒效果研究等各個領(lǐng)域

符合標(biāo)準(zhǔn)：

GB/T 15670.16-2017《農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗方法第16部分:體內(nèi)哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗》

二、試驗流程

1）動物選擇:常用嚙齒類動物（大鼠或小鼠），通常每組至少5只/性別。

2）給藥方案:

單次給藥:通常在采樣前12-48小時給藥（覆蓋細(xì)胞周期）

多次給藥:若受試物代謝或毒性需重復(fù)暴露。

3.陽性對照:已知致畸變劑（如環(huán)磷酰胺）

4.陰性對照:溶劑對照（如生理鹽水或DMSO）

5.采樣時間:通常在給藥后24小時和48小時采集骨髓細(xì)胞（覆蓋不同細(xì)胞周期階段）

6.染色體制備:

處死動物后取出骨髓細(xì)胞。

用秋水仙素（Colchicine）處理，阻斷細(xì)胞分裂于中期。低滲處理、固定、制片并染色（如Giemsa染色）

7.鏡檢分析:

觀察至少200個中期分裂相/動物，記錄畸變類型和頻率，

區(qū)分染色體型畸變（如雙著絲粒體）和染色單體型畸變（如斷裂）

三、結(jié)果判定

1）劑量相關(guān)性:畸變率隨劑量增加而升高。

2）統(tǒng)計學(xué)差異:試驗組畸變率顯著高于陰性對照組(如p<0.05)

3）生物學(xué)意義:需結(jié)合歷史對照數(shù)據(jù)和畸變類型綜合評估。