凍干人外周血細(xì)胞的方法、意義及應(yīng)用

 人外周血細(xì)胞常溫或者通常情況下保存周期短，需要超低溫設(shè)備，使用時不方便，為了提高其應(yīng)用價值開發(fā)了凍干型人外周血細(xì)胞凍干法。凍干型外周血細(xì)胞具有以下優(yōu)點：

長期保存細(xì)胞：凍干技術(shù)可使外周血細(xì)胞處于休眠狀態(tài)，長期保存細(xì)胞活性和功能，在需要時快速復(fù)蘇用于研究或治療，如保存免疫細(xì)胞用于后續(xù)免疫療法研究。

• 方便運輸與共享：凍干后細(xì)胞便于運輸，減少特殊設(shè)備需求和運輸成本，利于不同實驗室和醫(yī)療機構(gòu)間共享細(xì)胞資源，促進(jìn)科研合作和臨床應(yīng)用。

• 穩(wěn)定細(xì)胞特性：能有效保持細(xì)胞的生物學(xué)特性，包括細(xì)胞表面標(biāo)志物、細(xì)胞活性、細(xì)胞功能等，確保后續(xù)研究和應(yīng)用的準(zhǔn)確性。

• 應(yīng)急儲備：在自然災(zāi)害、戰(zhàn)爭等緊急情況下，作為細(xì)胞儲備，及時用于輸血、細(xì)胞治療等，保障醫(yī)療需求。

凍干型外周血細(xì)胞是采用真空冷凍干燥的方法進(jìn)行除水干燥的，干燥后的樣品外凍干粉餅，保存在棕色避光型西林瓶中，使用時可以加水或者復(fù)溶劑快速復(fù)溶。

凍干外周血細(xì)胞的流程：

  1. 細(xì)胞準(zhǔn)備：收集外周血細(xì)胞，通過離心等方法去除雜質(zhì)和血漿成分，得到純度較高的細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度至適宜范圍，如 1×10?-1×10? cells/mL。

  2. 添加保護(hù)劑：將凍干保護(hù)劑按一定比例加入細(xì)胞懸液中，輕輕混勻，使細(xì)胞充分與保護(hù)劑混合均勻。

  3. 預(yù)凍：將含有保護(hù)劑的細(xì)胞懸液放入低溫環(huán)境中預(yù)凍，如放入-80℃冰箱冷凍 2-4 小時或在液氮中快速冷凍，使細(xì)胞內(nèi)的水分凍結(jié)，形成細(xì)小的冰晶，減少冰晶對細(xì)胞的損傷。

  4. 升華干燥：將預(yù)凍后的細(xì)胞放入凍干設(shè)備中，開啟真空泵，降低壓力，使冰晶在低溫低壓下直接升華為水蒸氣并被移除，此過程需要嚴(yán)格控制溫度和壓力，防止細(xì)胞過熱或過度干燥。

  5. 后處理：升華干燥完成后，繼續(xù)在真空或充入惰性氣體的環(huán)境下進(jìn)行后處理，如進(jìn)一步降低溫度，使殘余的水分凍結(jié)并升華，確保細(xì)胞充分干燥，最后密封保存。

凍干后評價方法

• 細(xì)胞存活率測定：通過臺盼藍(lán)拒染法、CCK-8 法等檢測凍干復(fù)蘇后細(xì)胞的存活率，評估細(xì)胞的活性。

• 細(xì)胞活性檢測：采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的增殖能力、細(xì)胞周期分布等指標(biāo)，了解細(xì)胞的功能狀態(tài)；還可通過檢測細(xì)胞內(nèi)酶的活性等指標(biāo)，評估細(xì)胞的代謝功能。

• 細(xì)胞功能評估：對于特定類型的免疫細(xì)胞，如 T 細(xì)胞、NK 細(xì)胞等，可檢測其分泌細(xì)胞因子的能力、殺傷活性等，以評估細(xì)胞的功能完整性。

• 細(xì)胞表面標(biāo)志物檢測：利用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面特定標(biāo)志物的表達(dá)情況，判斷細(xì)胞的類型和狀態(tài)是否發(fā)生改變。

未來應(yīng)用

• 個性化醫(yī)療：根據(jù)患者的個體差異，凍干保存患者自身的外周血細(xì)胞，用于未來的個性化治療，如 CAR-T 細(xì)胞療法等，提高治療效果和安全性。

• 細(xì)胞治療：為細(xì)胞治療提供更穩(wěn)定、可靠的細(xì)胞來源，如凍干的造血干細(xì)胞可用于治療血液系統(tǒng)疾病，凍干的免疫細(xì)胞可用于腫瘤的免疫治療等。

• 生物制藥：在生物制藥領(lǐng)域，凍干人外周血細(xì)胞可用于生產(chǎn)細(xì)胞來源的生物制品，如細(xì)胞因子、抗體等，提高生物制品的質(zhì)量和穩(wěn)定性。

• 基礎(chǔ)研究：為研究人體免疫系統(tǒng)、血液系統(tǒng)等提供便利，科研人員可隨時獲取凍干的外周血細(xì)胞進(jìn)行實驗，深入研究細(xì)胞的生理功能、病理機制等。