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高效液相色譜柱承擔著混合物分離的關鍵任務

來源:艾杰爾飛諾美   2025年05月21日 18:19  
  高效液相色譜柱承擔著混合物分離的關鍵任務。其設計原理基于不同物質(zhì)在固定相和流動相之間的分配差異,通過分子與填料表面的相互作用實現(xiàn)分離。色譜柱的分離效率、選擇性和穩(wěn)定性直接影響分析結果的準確性與可靠性。
 
  高效液相色譜柱的分離過程依賴于樣品分子在固定相(色譜柱填料)和流動相(溶劑或緩沖液)之間的分配差異。當流動相攜帶樣品分子通過色譜柱時,分子因吸附、溶解、離子交換或分子排阻等作用,在兩相間反復分配,因遷移速度不同而實現(xiàn)分離。固定相通常由微小顆?;蚨嗫撞牧蠘嫵?,其表面化學性質(zhì)決定了分離的選擇性。例如,反相色譜柱采用非極性固定相(如C18烷基鏈),通過疏水作用實現(xiàn)極性差異較大的組分分離;而正相色譜柱則依賴極性固定相(如硅膠或氰基鍵合相),適用于極性化合物的分離。
 
  高效液相色譜柱的校準方法:
 
  1.使用標準物質(zhì)校準:選擇與待分析樣品性質(zhì)相似、保留行為已知的標準物質(zhì),按照一定的濃度梯度進行進樣分析,繪制標準曲線。然后對待分析樣品進行測定,根據(jù)標準曲線計算出樣品中各組分的含量。這種方法可以校正色譜柱在分析過程中的誤差,提高分析結果的準確性。
 
  2.保留時間校準:在相同的色譜條件下,定期進樣已知保留時間的標準物質(zhì),檢查色譜柱的保留時間是否發(fā)生變化。如果保留時間發(fā)生偏移,可以通過調(diào)整流動相的組成、流速或溫度等參數(shù),使標準物質(zhì)的保留時間恢復到正常值,從而實現(xiàn)對色譜柱的校準。
 
  3.峰面積或峰高校準:利用已知濃度的標準物質(zhì)溶液,進樣不同體積或不同濃度的樣品,得到一系列峰面積或峰高對應的濃度數(shù)據(jù),建立峰面積或峰高與濃度的定量關系。在實際樣品分析中,根據(jù)測得的峰面積或峰高,通過該定量關系計算出樣品中各組分的濃度。同時,也可以定期檢查這種定量關系是否發(fā)生變化,若發(fā)生變化則需重新校準。
高效液相色譜柱

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