間型假絲酵母的培養(yǎng)方法與活化步驟及操作說明！

間型假絲酵母是Candida屬的微生物，原產(chǎn)地為中國。白色至奶油色的奶油樣菌落，營養(yǎng)體細(xì)胞出芽生殖，有簡單至復(fù)雜的假菌絲，無有性生殖。主要用途為研究，具體用途為近海酵母。

一、菌種簡介

平臺編號：Bio-06219

提供形式：凍干物

拉丁屬名：Candida Intermedia

中文譯名：間型假絲酵母

拉丁學(xué)名：Candida intermedia

保藏人：鐘耀明

直接來源國家：中國

保藏時(shí)間：12/1/1958

生物危害：四類

模式菌株：非模式菌株

菌株用途：色氨酸；尿酸酶

培養(yǎng)溫度：25-28℃

培養(yǎng)基：0013    

分離源：柿子

采集國家：中國

用途：色氨酸；尿酸酶

注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn)）

二、微生物培養(yǎng)方法

1、平板劃線分離法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面，通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落。

2、稀釋涂布平板法將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。

上述兩種方法雖然都可以實(shí)現(xiàn)觀察菌落特征的目的，但平板劃線分離法不能對菌落計(jì)數(shù)，而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過程復(fù)雜，對平板的要求比較高，可參照以下步驟：

a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃，向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均勻，然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿，輕輕搖動培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部，待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。

b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g，放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖15～20min混合均勻，用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻，制成活性污泥混合液。

c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培養(yǎng)基表面的位置，用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴(kuò)展，使之分布均勻。

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1、稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查

2、干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物

3、高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查

4、過濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌

四、活化步驟

凍干粉活化，將菌粉甩至底部，將尖頭一側(cè)用酒精消毒后敲開，取0.2-0.3ml溶解液加入至菌種管中，輕輕彈至菌粉混合均勻，用無菌吸頭全部吸出溶解液，全部接種至2支斜面上培養(yǎng)。注意真空菌種管一旦敲開里面的凍干粉就必須全部被用掉，留著也沒用。如果有不明白之處，應(yīng)先與我司聯(lián)系，避免不必要的損失。

五、菌種培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1、微生物菌種應(yīng)保存于低溫、清潔和干燥的地方，室溫放置時(shí)間過長會導(dǎo)致菌種衰退；

2、菌種操作在無菌條件下進(jìn)行，接種完畢應(yīng)該滅菌再做丟棄處理；

3、斜面菌種和穿刺菌種保存時(shí)間通常為 3-6 個(gè)月，應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時(shí)結(jié)轉(zhuǎn)；凍干粉保存時(shí)間通常是 2-25 年；甘油菌保存時(shí)間為 2-5 年;

4、凍干首-次活化，干粉要全部用完，不能保留。用0.2-0.5m1的培養(yǎng)液或者無菌水溶解,接種在1-2個(gè)平板上，因凍干菌種處于休眠狀態(tài)，請勿接種多個(gè)平板，以免因接種量不足而導(dǎo)致復(fù)蘇不成功。

5、如果有不明白之處，應(yīng)先與我中心聯(lián)系，避免不必要的損失。

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