A0500-3010胎牛血清使用步驟說(shuō)明

A0500-3010胎牛血清使用步驟說(shuō)明

胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）是由胎牛血凝集而成的液體組分，不含細(xì)胞、纖維蛋白和凝血因子，但含有大量細(xì)胞生長(zhǎng)所必需的營(yíng)養(yǎng)因子和大分子因子。牛血清白蛋白是牛血清蛋白的主要成分。胎牛血清中的生長(zhǎng)因子對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的維持和生長(zhǎng)是需要的。FBS還含有各種小分子，如氨基酸、糖、脂和激素。

胎牛血清的主要用途之一是真核細(xì)胞培養(yǎng)，其濃度高達(dá)20%甚至更高，可提供許多促進(jìn)細(xì)胞存活和增殖的必需營(yíng)養(yǎng)和生長(zhǎng)因子。然而，要注意到，人類細(xì)胞培養(yǎng)中的胎牛血清可能會(huì)引入人工制品；用人血清培養(yǎng)的人細(xì)胞與用胎牛血清培養(yǎng)的人細(xì)胞的行為不同。FBS還用于人類和獸用疫苗以及生物技術(shù)藥物的研究、制造和控制，并用于阻止胰蛋白酶消化或作為低溫保存的保護(hù)劑。

1.血清解凍

建議將血清從冰箱先移至2-8℃冰箱解凍，不宜在較高溫度下進(jìn)行解凍，解凍溫度較高會(huì)導(dǎo)致血清渾濁、沉淀增加、品質(zhì)下降等問(wèn)題。解凍過(guò)程中需要輕輕搖晃混合，嚴(yán)禁將血清直接放在37℃長(zhǎng)時(shí)時(shí)間孵育解凍。

如您是儲(chǔ)存在-80℃的血清，需提前幾天轉(zhuǎn)移至-20℃冰箱中(至少24小時(shí))，使用前轉(zhuǎn)移至4℃冰箱中緩慢融化，融化過(guò)程中需不定期多次緩慢輕柔搖動(dòng)瓶身使血清混勻，搖晃過(guò)程中避免劇烈搖晃產(chǎn)生泡沫。

2.血清濃度

原則上血清添加量不要太多，通常分為5%、10%、20%幾檔，部分細(xì)胞原代提取時(shí)會(huì)使用20%血清，大部分細(xì)胞正常培養(yǎng)時(shí)會(huì)使用10%的血清濃度。至于某一株細(xì)胞適應(yīng)什么樣的血清濃度，還需要根據(jù)細(xì)胞特性、實(shí)驗(yàn)?zāi)康淖鰷y(cè)試和調(diào)校。

3.血清熱滅活

血清熱滅活是為了去除補(bǔ)體，補(bǔ)體是免疫系統(tǒng)的一部分，在體內(nèi)可通過(guò)多條途徑被激活，從而發(fā)揮調(diào)理吞噬裂解細(xì)胞、介導(dǎo)炎癥、免疫調(diào)節(jié)和清除免疫復(fù)合物等多種作用。如果不涉及以上實(shí)驗(yàn)，可以不進(jìn)行血清熱滅活。

4.血清試用：

血清開(kāi)始進(jìn)行試用時(shí)，如果是重新復(fù)蘇細(xì)胞，建議用原培養(yǎng)體系進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇，待細(xì)胞狀態(tài)進(jìn)入狀態(tài)后再進(jìn)行測(cè)試。測(cè)試時(shí)不建議直接100%直接換成新血清體系進(jìn)行培養(yǎng)，而應(yīng)該按照比例進(jìn)行梯度替換(例如，換液按照新舊體系1:3，第二次換液1:1，第三次換液3:1，而后替換。對(duì)于一些對(duì)培養(yǎng)體系比較敏感的細(xì)胞，可以進(jìn)一步優(yōu)化替換比例。)通過(guò)這種方法可以避免細(xì)胞因環(huán)境改變而出現(xiàn)應(yīng)激或者異常造成不必要的損失。

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