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熒光細(xì)胞分析儀基于熒光標(biāo)記與檢測原理，實現(xiàn)對細(xì)胞的精準(zhǔn)分析。其底層原理主要涉及熒光標(biāo)記、激發(fā)與發(fā)射、信號采集與分析等環(huán)節(jié)。
熒光標(biāo)記是關(guān)鍵步驟，利用熒光蛋白或熒光素酶報告基因作為標(biāo)志物，如綠色熒光蛋白（GFP）和紅色熒光蛋白（RFP），通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)構(gòu)建到載體上，對研究細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。這些標(biāo)志物與細(xì)胞內(nèi)的特定分子結(jié)合，從而實現(xiàn)對目標(biāo)分子的標(biāo)記。
在檢測過程中，熒光細(xì)胞分析儀使用特定波長的光作為激發(fā)光源，通常為紫外光或可見光。當(dāng)激發(fā)光照射到被標(biāo)記的細(xì)胞上時，熒光物質(zhì)吸收光能并躍遷到高能級狀態(tài)。由于高能級狀態(tài)不穩(wěn)定，熒光物質(zhì)會迅速返回低能級狀態(tài)，并在此過程中發(fā)射出特定波長的熒光。
發(fā)射出的熒光信號被熒光細(xì)胞分析儀的光學(xué)系統(tǒng)收集并傳輸至檢測器。檢測器將熒光信號轉(zhuǎn)換為電信號，再經(jīng)過數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)的處理，如放大、濾波、數(shù)字化等操作，最終得到細(xì)胞的定性或定量分析結(jié)果。
以CountstarRigel全自動熒光細(xì)胞分析儀為例，它基于圖像法檢測，配合多熒光通道，通過采集圖像中的細(xì)胞信息，進(jìn)行定量分析。它既能提供細(xì)胞群的統(tǒng)計數(shù)據(jù)，又可以獲得單個細(xì)胞的圖像，從而提供細(xì)胞形態(tài)學(xué)信息。圖像采集系統(tǒng)同時產(chǎn)生明場以及四張熒光圖像，讓實驗結(jié)果更為直觀。
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