?ApoH捕獲BAC試劑盒-數(shù)據(jù)表

ApoH捕獲BAC試劑盒

ApoH捕獲BAC試劑盒

描述：

ApoHCaptoBAC試劑盒在大多數(shù)樣本中進(jìn)行細(xì)菌捕獲。它包括涂有ApoH的磁珠和一種特別開發(fā)的緩沖液，以確保最佳的細(xì)菌捕獲。

樣品按照試劑盒說明在緩沖液中稀釋后加入磁珠。短暫振蕩后，將上清液移除，磁鐵（未提供）固定磁珠以保持其在底部。然后細(xì)菌在磁珠上濃縮，并且沒有潛在的抑制劑。可以使用常規(guī)檢測(cè)方法進(jìn)行分析。

該產(chǎn)品的保質(zhì)期為2年，需在28°C保存。該產(chǎn)品有兩種測(cè)試格式，分別為25或50。

參考編號(hào)：MP1001150T

• 數(shù)量：50個(gè)測(cè)試

• 價(jià)格：839 €（不含稅）

成分：

• 1 mL ApoH 磁珠 (參考編號(hào): MP200011ML)

• 50毫升緩沖液TTGB 10X（編號(hào)：TP1000450ML）

ApoHCaptoBAC 試劑盒

參考文獻(xiàn)：MP10011

僅供研究使用

28°C

參考文獻(xiàn)

 有效期

 儲(chǔ)存溫度范圍：28°C

 批號(hào)

 參考編號(hào)

ApOHO

提升靈敏度，改進(jìn)診斷水平

 一、簡(jiǎn)介

ApoH 是一種血漿蛋白，能夠結(jié)合包括病毒（12）、真菌（3）和細(xì)菌（46）在內(nèi)的微生物。ApoH 蛋白也被稱為載脂蛋白 H 或β2 糖蛋白 1。其多特異性特點(diǎn)使得多種微生物的多重檢測(cè)成為可能。這種親和捕獲方法操作簡(jiǎn)單、溫和且快速，能夠讓微生物保持活性和感染性。捕獲的微生物被濃縮并與潛在抑制劑分離，從而更易于通過常用的特異性技術(shù)進(jìn)行鑒定/檢測(cè)，進(jìn)而提高了檢測(cè)靈敏度（710）。

這些特性使得 ApoHCaptoBAC 試劑盒成為一種創(chuàng)新的樣本預(yù)處理工具，可用于細(xì)菌分離前的操作，以便進(jìn)行靈敏的鑒定/檢測(cè)。

 二、原理

在 ApoHCaptoBAC 試劑盒中，ApoH 與磁珠結(jié)合。該試劑盒配備了一種特殊的結(jié)合緩沖液，可增強(qiáng) ApoH 對(duì)細(xì)菌的親和力。將 ApoH 磁珠添加到任何復(fù)雜的生物介質(zhì)中，并在提供的緩沖液中進(jìn)行稀釋。初始樣本及其潛在抑制劑可以被去除，而通過 ApoH 與磁珠連接的捕獲細(xì)菌則利用磁鐵保留在試管中。然后，細(xì)菌即可用于通過分子技術(shù)（如 PCR）、免疫檢測(cè)（如 ELISA、WB）或在適當(dāng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)等方法進(jìn)行鑒定/檢測(cè)。

 三、試劑

 參考文獻(xiàn) MP20001  ApoH 磁珠

ApoH 包被磁珠懸浮液中，每毫升含有\(10^{13}\)個(gè)直徑約為 200 nm 的磁珠，懸浮在含有\(<0.02\%\)疊化鈉的緩沖液中。

 參考文獻(xiàn) TP10004  10X TTGB 緩沖液

10X TTGB 緩沖液是一種淺黃色水性結(jié)合緩沖液，經(jīng) 0.2 µm 過濾且為 10 倍濃縮液。按以下說明進(jìn)行稀釋。

注意：試劑盒中包含的所有試劑均可單獨(dú)購(gòu)買。

 四、儲(chǔ)存

 所有試劑在室溫下運(yùn)輸時(shí)功能不受影響，收到后請(qǐng)儲(chǔ)存于 28°C。

 所有試劑在 28°C 下可保持穩(wěn)定直至有效期。

 ApoH 磁珠小瓶應(yīng)直立存放，以確保磁珠始終處于儲(chǔ)存溶液中。

 使用后，所有試劑應(yīng)迅速儲(chǔ)存于 28°C。

 五、所需材料（未提供）

 無菌蒸餾水。

 合適的微量移液器和無菌過濾吸頭。

 合適的反應(yīng)管，玻璃或塑料材質(zhì)（僅限聚丙烯，避免使用聚苯乙烯）。

 孵育過程中用于樣本攪拌的合適設(shè)備。

 可調(diào)節(jié)至適當(dāng)溫度的培養(yǎng)箱。

 層流柜或針對(duì)目標(biāo)微生物類型所需的特定微生物環(huán)境。

 與試管兼容的側(cè)向吸引專用磁性裝置；請(qǐng)注意，不同市售磁鐵的吸引效率和速度有所不同。

 用于揭示目標(biāo)微生物所需的材料和試劑。

 六、安全與注意事項(xiàng)

 為了更好地保持穩(wěn)定性，所有試劑的處理必須小心，避免任何污染。

 是否需要無菌工作區(qū)域?qū)⑷Q于捕獲微生物的用途（培養(yǎng)時(shí)為必需）。

 ApoH 磁珠儲(chǔ)存緩沖液中含有\(<0.02\%\)的疊化鈉。疊化鈉的痕量不會(huì)干擾捕獲過程，也不會(huì)影響微生物的活性：使用前無需洗滌磁珠。疊化鈉可能與銅或鉛管道發(fā)生反應(yīng)，形成爆炸性金屬疊氮化物。通過管道處理時(shí)，需用大量水沖洗，以防止疊氮化物積聚。

 ApoH 是一種源自人類的蛋白質(zhì)。盡管這種蛋白質(zhì)是從血漿或血清中純化而來，并且在采集時(shí)根據(jù)歐洲法規(guī)不含感染性因子（HIV、HBV、HCV），但仍建議將 ApoH 磁珠作為潛在感染性產(chǎn)品進(jìn)行處理。

 試劑和標(biāo)本的處理應(yīng)符合良好的實(shí)驗(yàn)室規(guī)范。未使用的試劑、樣本和廢物的處理應(yīng)符合當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)。

 請(qǐng)勿使用過期試劑。

 七、重要說明

本方案旨在為最多 5 mL 樣本中的細(xì)菌結(jié)合提供一般指導(dǎo)。根據(jù)細(xì)菌菌株、樣本性質(zhì)和體積，可能需要進(jìn)一步優(yōu)化以實(shí)現(xiàn)最佳結(jié)合能力。ApoH 捕獲的機(jī)制不同于常規(guī)的抗原抗體相互作用。為確保您的實(shí)驗(yàn)取得更好的成功，請(qǐng)聯(lián)系我們的技術(shù)支持

在細(xì)菌捕獲之前，ApoH 磁珠不得渦旋、冷凍、干燥、在高溫（>60°C）或極 pH（>9 或 <5）條件下處理。如果需要保留有活力的微生物，捕獲后也應(yīng)采取同樣的注意事項(xiàng)。

 僅在懷疑微生物負(fù)載較高時(shí)增加磁珠體積。磁珠能夠結(jié)合大量微生物：1 µL 磁珠可從純培養(yǎng)物中結(jié)合\(1×10^{7}\)個(gè)大腸桿菌。

 八、樣本采集與處理

我們目前的數(shù)據(jù)表明，ApoH 磁珠可以捕獲各種固體（懸浮后）或液體樣本中的細(xì)菌。

 將固體樣本（如肉類、組織）在稀釋至 1X 的捕獲緩沖液中研磨。然后在添加磁珠之前，用無菌紗布過濾混合物，否則磁珠可能會(huì)被樣本碎片卡住，無法被磁化。

 優(yōu)先使用新鮮樣本，避免混合樣本。混合的血液、混合的血清或混合的血漿可能會(huì)形成凝塊，能夠捕獲和聚集磁珠，從而使磁珠無法用于結(jié)合微生物。

 在細(xì)菌添加的情況下，使用臨床菌株而非“標(biāo)準(zhǔn)”細(xì)菌（如 ATCC 菌株 = 美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心菌株）。實(shí)際上，許多標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌會(huì)失去對(duì) ApoH 蛋白或 ApoH 衍生的 Peps6 分子的吸引力。

 使用全血時(shí)，選擇 EDTA 抗凝劑。

 所有稀釋或處理后的樣本應(yīng)迅速與 ApoH 磁珠接觸。

 樣本體積可按比例放大或縮小。如果懷疑微生物滴度較低，可按比例放大樣本體積。對(duì)于體積超過 5 mL 的樣本，請(qǐng)聯(lián)系我們的技術(shù)支持。

受損的微生物可能會(huì)失去對(duì) ApoH 蛋白或 ApoH 衍生的 Peps6 分子的親和力，因此：

 優(yōu)先使用新鮮材料。

 檢查冷凍樣本中細(xì)菌的活力。應(yīng)避免樣本的反復(fù)凍融循環(huán)。

 使用質(zhì)量較差的起始材料會(huì)導(dǎo)致靈敏度降低。

 九、使用說明

 樣本在捕獲緩沖液中的稀釋

將樣本在捕獲緩沖液中稀釋，然后渦旋。樣本稀釋后緩沖液的最終濃度必須為 1X：

 小體積樣本（1199 µL）：將 10X TTGB 緩沖液在無菌蒸餾水中稀釋至 1X 濃度。向樣本中加入足夠的 1X TTGB 緩沖液，使總體積達(dá)到 1 mL。

 大體積樣本（0.25.0 mL）：將 10X TTGB 緩沖液在無菌蒸餾水中稀釋至 2X 濃度。將 1 體積的 2X TTGB 緩沖液加入 1 體積的樣本中。

 捕獲

 使用前，通過輕輕吸液或手動(dòng)倒置小瓶底重懸 ApoH 磁珠（請(qǐng)勿渦旋）。

 每個(gè)樣本添加 20 µL ApoH 磁珠。

 輕輕混勻（請(qǐng)勿渦旋）。

 在 3537°C 下適當(dāng)攪拌孵育 30 分鐘：試管應(yīng)保持直立并劇烈攪拌，以使 ApoH 磁珠保持懸浮狀態(tài)。例如，將 Thermomixer 設(shè)置為 1000 rpm。

 將反應(yīng)管置于磁鐵上，直至所有 ApoH 磁珠側(cè)向沉淀且上清液變澄清。

 丟棄上清液，不要擾動(dòng) ApoH 磁珠沉淀。此時(shí)細(xì)菌已濃縮在沉淀中。

 洗滌（可選）

純培養(yǎng)物、血漿或血清無需洗滌。全血等復(fù)雜樣本可能需要洗滌：

 在磁鐵上的磁珠沉淀上輕輕加入 1 mL PBS（不含\(Ca^{2+}/Mg^{2+}\)）。不要懸浮磁珠。

 丟棄上清液，不要擾動(dòng) ApoH 磁珠沉淀。

 如有需要，重復(fù)洗滌步驟一次。

 十、細(xì)菌檢測(cè)

結(jié)合的細(xì)菌可使用您的標(biāo)準(zhǔn)方案直接在 ApoH 磁珠上進(jìn)行檢測(cè)，必要時(shí)可進(jìn)行調(diào)整。注意：對(duì)于小體積樣本，在添加重懸液之前對(duì)磁珠沉淀進(jìn)行短時(shí)間離心。

 培養(yǎng)：將 ApoH 磁珠重懸于適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中。直接將懸浮液接種到培養(yǎng)皿中。在細(xì)菌的最適溫度下孵育。

 PCR：將 ApoH 磁珠重懸于您的裂解緩沖液中。劇烈渦旋 15 秒以破壞磁珠沉淀。裂解步驟后，通過磁鐵或在 10,000 g 下離心 1 分鐘去除 ApoH 磁珠。將上清液轉(zhuǎn)移到新管中。按照您常用的 DNA 提取和 PCR 方案進(jìn)行操作。

 顯微鏡觀察：將 ApoH 磁珠重懸于 PBS 或您的特定培養(yǎng)基中。磁珠無自發(fā)熒光，可用于熒光應(yīng)用。

 其他：將 ApoH 磁珠重懸于適合其他應(yīng)用的適當(dāng)溶液中。有關(guān)其他特定應(yīng)用，請(qǐng)聯(lián)系我們的技術(shù)支持。

 十一、故障排除

以下提供一些指導(dǎo)原則。如有任何剩余問題、需要進(jìn)一步信息或需要針對(duì)您的特定應(yīng)用定制方案，請(qǐng)聯(lián)系我們的技術(shù)支持

 磁珠和緩沖液的處理

 在無菌環(huán)境中打開 ApoH 磁珠小瓶：污染會(huì)降低穩(wěn)定性并影響效率。

 始終將 ApoH 磁珠添加到樣本中，而不是相反。

 使用無菌蒸餾水進(jìn)行緩沖液稀釋。檢查樣本中混合后的 TTGB 緩沖液確實(shí)為 1X 濃度。

 檢查 TTGB 緩沖液是否未被污染。

 根據(jù)微生物或樣本的不同，捕獲緩沖液的選擇和用量可能需要優(yōu)化。

 大體積樣本

 大體積樣本（5100 mL）需要比試劑盒中包含的更多磁珠和緩沖液。它們可以單獨(dú)購(gòu)買。

 樣本在捕獲緩沖液中的稀釋：將 2X 或 10X 濃縮的 TTGB 緩沖液直接添加到樣本中，以達(dá)到 1X 最終緩沖液濃度。

 每個(gè)樣本添加 20 µL ApoH 磁珠，除非樣本超過 10 mL。如果是這樣，可能需要增加磁珠體積。

 超過 20 mL 的樣本可以通過軌道攪拌（將輪子設(shè)置為 3 rpm）代替 1000 rpm 的直立攪拌進(jìn)行攪拌。

 大體積樣本需要時(shí)間達(dá)到合適的溫度。在添加磁珠之前，讓樣本達(dá)到室溫或孵育溫度。

 孵育

 遵守孵育的溫度和時(shí)間，以確保獲得最佳結(jié)果。

 選擇足夠大的試管以確保正確攪拌，例如：使用 1.5 mL 試管進(jìn)行 1 mL 反應(yīng)。

 試管應(yīng)保持直立（小試管和中試管）并劇烈攪拌，以使磁珠保持懸浮狀態(tài)。例如，將 Thermomixer 設(shè)置為 1000 rpm。

 僅使用玻璃或聚丙烯塑料管，避免使用聚苯乙烯。

 磁化

 如果上清液中仍有一些磁珠或磁珠沉淀被吸頭破壞，增加磁化時(shí)間。通常，此步驟的時(shí)間范圍為 2 分鐘（對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)）至 15 分鐘（對(duì)于全血）。

 使用高能量釹磁鐵（812 kg 吸引力），以確保磁珠全磁化。低磁力磁鐵會(huì)導(dǎo)致磁珠和微生物損失。太強(qiáng)的磁鐵可能會(huì)將磁珠嵌入塑料管中。

 在吸出上清液之前，去除漂浮的氣泡。

 不要讓磁珠磁化超過 30 分鐘。微生物的完整性可能會(huì)受到損害。

 洗滌

 細(xì)胞上清液、血漿或血清無需洗滌，除非檢測(cè)系統(tǒng)非常敏感。全血等復(fù)雜樣本可能需要對(duì)磁珠沉淀進(jìn)行 2 次洗滌。在磁鐵上洗滌。切勿在洗滌溶液中渦旋磁珠。

 PBS 可以用另一種洗滌緩沖液代替。聯(lián)系我們的技術(shù)支持以檢查其與該程序的兼容性。

 檢測(cè)

 一些細(xì)菌物種在捕獲后無法生長(zhǎng)。這些細(xì)菌處于有活力但不可培養(yǎng)的狀態(tài)。通過顯微鏡或 PCR 檢查捕獲情況。

 在適用的情況下，裂解步驟對(duì)于成功檢測(cè)微生物至關(guān)重要。裂解緩沖液的效率在很大程度上取決于化學(xué)配方，并且可能因供應(yīng)商而異。如果可能，添加裂解對(duì)照以檢查效率。不要猶豫在裂解緩沖液中劇烈渦旋 ApoH 磁珠。

 如果需要進(jìn)行光密度測(cè)量，請(qǐng)用磁鐵去除磁珠，僅測(cè)試上清液。磁珠呈深棕色，會(huì)極大地干擾光學(xué)測(cè)量。

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