凝膠色譜憑借其溫和的分離條件、可量化的分離效果,已成為現代分離科學中不可少的工具。隨著新型填料和檢測技術的突破,其在準確醫(yī)療、新材料研發(fā)等領域的應用前景將更加廣闊。
現代凝膠色譜儀通常包含五大模塊:
1.輸液系統:高壓恒流泵(可達5000 psi)確保流動相穩(wěn)定輸送;
2.進樣系統:自動進樣器支持多樣品序列分析;
3.色譜柱:填充球形硅膠或瓊脂糖凝膠(粒徑3-10μm),理論塔板數可達105/m;
4.檢測器:紫外檢測器(波長254/280nm)、示差折光檢測器(RI)或多角度激光光散射檢測器(MALS);
5.數據處理系統:配備GPC軟件進行分子量校準與譜圖解析。
凝膠色譜儀的測定步驟:
1.樣品準備:將待測樣品溶解在適當的溶劑中,確保樣品溶解且無雜質。對于生物樣品,可能需要進行預處理,如離心、過濾等,以去除不溶物和雜質。
2.色譜柱裝填:選擇合適的凝膠填料,根據實驗要求裝填到色譜柱中。裝填過程中要確保凝膠均勻分布,無氣泡和裂縫。
3.流動相選擇:根據樣品的性質和實驗要求,選擇合適的流動相。流動相應能夠溶解樣品,并與凝膠填料相容。
4.樣品進樣:將準備好的樣品通過進樣器注入到色譜柱的頂部,確保樣品均勻分布在凝膠表面。
5.洗脫與分離:開啟流動相,使其通過色譜柱。由于凝膠的分子篩效應,不同大小的分子將以不同的速度在色譜柱中移動,從而實現分離。
6.檢測與記錄:使用適當的檢測器(如紫外檢測器、示差折光檢測器等)監(jiān)測流出的液體,并記錄各組分的保留時間和峰面積等信息。
7.數據處理與分析:根據記錄的數據,計算各組分的相對分子質量、含量等信息,并進行進一步的分析和討論。

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